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用于微塑料检测的塑料结合DNA适配体的选择

期刊:Angewandte Chemie International EditionDOI:10.1002/anie.202421438

该文档属于类型a,即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告:


作者及机构
本研究由Mohamad Zandieh、Xin Luo、Yu Zhao*、Chuanliang Feng和Juewen Liu*合作完成。主要作者来自加拿大滑铁卢大学化学系及纳米技术研究所(University of Waterloo, Department of Chemistry, Waterloo Institute for Nanotechnology),部分作者来自中国湖北工业大学(Hubei University of Technology)和上海交通大学(Shanghai Jiao Tong University)。研究发表于《Angewandte Chemie International Edition》2025年第64卷,文章编号e202421438。

学术背景
研究领域为环境科学与材料化学交叉领域,聚焦微塑料(microplastics)污染问题。微塑料作为全球性环境污染物,对生态系统和人类健康构成潜在威胁,但现有检测技术(如拉曼光谱、傅里叶变换红外光谱等)存在成本高、操作复杂或特异性不足的局限性。DNA适配体(aptamer)因其高稳定性、易修饰和低成本的优势,被广泛用于生物传感领域,但此前尚未开发出针对塑料表面的适配体。本研究旨在筛选能特异性结合聚氯乙烯(PVC)和聚苯乙烯(PS)的DNA适配体,为微塑料检测提供新方法。

研究流程
1. 适配体筛选(SELEX)
- 目标材料:PVC(弱DNA吸附性)和PS(中等吸附性),通过实验室研磨塑料制品制备微塑料颗粒,并通过拉曼光谱验证成分(图2a)。
- 文库设计:使用含30个随机核苷酸(N30)的DNA文库, flanked by恒定区用于PCR扩增,初始文库包含约3×10¹²种序列。
- 筛选步骤:共10轮筛选,每轮通过孵育、洗涤(去除未结合DNA)和Tween 80释放结合DNA,PCR扩增后进入下一轮(图1b)。最终通过高通量测序分析富集序列。

  1. 结合特性表征

    • 特异性验证:比较PVC-1适配体与随机序列DNA(rdna1)的结合能力,发现PVC-1对PVC的结合量高6倍(图3b)。
    • 突变体分析:设计碱基突变体(mut-1和mut-2),证实结合依赖嘧啶(C/T)富集而非特定序列(图3b)。
    • 结合等温线:Langmuir模型拟合显示PVC-1的亲和常数(Kₗ)为109 nM,优于随机序列(277 nM)(图3c)。
  2. 选择性测试

    • 材料范围:测试10种塑料(如PP、PE、PET)和3种非塑料材料(如二氧化硅)。PVC-1对PVC和PS结合最强,PET因强非特异性吸附干扰检测(图4b-d)。
    • 竞争实验:加入未标记随机DNA(rdna2)后,PVC和PS的适配体解离率最低(约30%),表明高亲和力(图4c)。
  3. 分子动力学模拟

    • 吸附机制:全原子模拟显示适配体通过嘧啶富集的环区与塑料表面形成范德华力接触,最大化了吸附位点(图5)。
  4. 微塑料检测应用

    • 荧光检测:FAM标记的PVC-1适配体可检测低至1 mg的PVC/PS,检测限分别为0.5 mg和0.6 mg(图6a-b)。
    • 显微镜成像:适配体可区分PVC与聚乙烯(PE)或二氧化硅颗粒(图6c)。

主要结果
1. 序列特征:筛选出的适配体(如PVC-1)含90%嘧啶(C/T),无保守基序,通过柔性环结构最大化表面接触(图2b-c)。
2. 广谱结合性:PVC-1对PS同样高效结合,独立筛选PS适配体时重现相同序列,表明其为通用塑料结合基序(图S7-S8)。
3. 表面结合机制:区别于小分子适配体的“口袋结合”,塑料适配体通过多接触点吸附,嘧啶富集减少二级结构对吸附的阻碍。

结论与价值
1. 科学意义:首次揭示DNA适配体与塑料表面的非特异性吸附机制,提出嘧啶富集是表面结合适配体的共性特征。
2. 应用价值:开发的适配体为微塑料检测提供了低成本、高特异性的荧光或显微成像工具,尤其适用于复杂环境样品(如废水,图S12)。
3. 方法论创新:明确了适配体筛选对材料表面吸附强度的要求(如避免PET等强吸附材料),为其他表面适配体开发提供参考。

研究亮点
1. 新颖发现:首次报道塑料结合适配体,并揭示其嘧啶富集的通用序列特征。
2. 技术突破:结合实验与模拟阐明了表面适配体的吸附机制。
3. 跨学科应用:将DNA纳米技术拓展至环境污染物检测领域。

其他价值
研究还探讨了微塑料粒径、老化程度对检测的影响(图S4-S5),证实方法的鲁棒性。分子动力学模拟数据(图S9-S11)为后续优化适配体设计提供了理论依据。


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