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利用微阵列技术探索植物乳杆菌基因组多样性

期刊:journal of bacteriologyDOI:10.1128/jb.187.17.6119–6127.2005

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作者及发表信息

该研究由Douwe Molenaar、Françoise Bringel、Frank H. Schuren、Willem M. de Vos、Roland J. Siezen和Michiel Kleerebezem等人共同完成。研究团队来自多个机构,包括荷兰瓦赫宁根食品科学中心(Wageningen Centre for Food Sciences)、荷兰NIZO食品研究所(NIZO Food Research)、法国斯特拉斯堡路易·巴斯德大学(Université Louis Pasteur Strasbourg-I)以及荷兰TNO营养研究所(TNO Voeding)。该研究于2005年9月发表在《Journal of Bacteriology》上,卷号为187,期号为17,页码为6119–6127。

学术背景

该研究的主要科学领域是微生物基因组学,特别是乳酸菌(Lactobacillus plantarum)的基因组多样性研究。Lactobacillus plantarum是一种广泛存在于不同生态环境中的多用途细菌,能够利用多种可发酵的碳源。由于其在不同环境中的适应性,研究者推测这种多样性可能与其基因库的可变性有关。为了验证这一假设,研究团队使用微阵列技术对20株不同来源的Lactobacillus plantarum菌株进行了严格的基因分型。研究的背景知识包括细菌基因组的进化可塑性、水平基因转移(horizontal gene transfer)在细菌适应环境中的作用,以及基因组中特定区域(如生活方式适应岛,lifestyle adaptation island)的功能。研究的主要目标是探索Lactobacillus plantarum基因组中的可变区域,特别是与糖代谢相关的基因,并验证这些区域是否与其环境适应性相关。

研究流程

研究共分为多个步骤,主要包括菌株培养、染色体DNA提取、微阵列设计、荧光标记与杂交、数据扫描与分析等。

  1. 菌株培养:研究使用了20株不同来源的Lactobacillus plantarum菌株(见表1)。这些菌株在MRS培养基中于30°C下无氧培养,直至达到指数生长期。

  2. 染色体DNA提取:从每株菌中提取染色体DNA。具体步骤包括细胞裂解、蛋白质消化、酚-氯仿提取和DNA沉淀。提取的DNA浓度通过260 nm处的吸光度进行测定。

  3. 微阵列设计:研究使用基于克隆的DNA微阵列,覆盖了Lactobacillus plantarum WCFS1菌株基因组的80.8%。微阵列中的DNA片段通过PCR从WCFS1基因组文库中扩增,并固定在醛基包被的玻璃片上。

  4. 荧光标记与杂交:每株菌的基因组DNA与WCFS1参考DNA共同杂交,使用Cy5和Cy3荧光染料进行标记。杂交条件严格,以确保特异性。

  5. 数据扫描与分析:杂交后的微阵列通过扫描仪进行扫描,使用Imagene 4.2软件进行初步数据分析。数据进一步通过局部拟合(lowess算法)进行归一化,并使用误差模型进行统计分析。

主要结果

  1. 基因分型结果:研究发现,Lactobacillus plantarum菌株之间的基因含量存在显著差异,特别是在糖转运和代谢相关基因中。这些差异主要集中在基因组的两个大区域(2.70–2.85 Mb和3.10–3.29 Mb),这些区域被推测为生活方式适应岛。

  2. 功能类别分析:研究将WCFS1菌株的基因分为多个功能类别,发现与糖代谢相关的基因在可变区域中显著富集。此外,调控蛋白(如LacI家族调控蛋白)也在这些区域中过度表达。

  3. 进化历史重建:通过比较不同菌株的基因含量,研究发现这些可变区域的进化历史复杂,可能涉及多次基因获得或丢失事件。这表明Lactobacillus plantarum基因组具有高度的进化可塑性。

结论

该研究验证了Lactobacillus plantarum基因组中存在高度可变的生活方式适应岛,这些区域与其环境适应性密切相关。特别是糖代谢相关基因的富集,表明这些区域在细菌适应不同环境中的重要作用。研究结果支持了水平基因转移在细菌基因组进化中的重要性,并为理解细菌如何在多样化的生态环境中适应提供了新的视角。

研究亮点

  1. 重要发现:研究首次系统性地揭示了Lactobacillus plantarum基因组中的生活方式适应岛,并验证了这些区域与其环境适应性之间的关联。
  2. 方法创新:研究使用了基于微阵列的基因分型技术,结合严格的统计分析,为研究细菌基因组多样性提供了高效且可靠的方法。
  3. 研究对象特殊性:Lactobacillus plantarum作为一种广泛存在于不同环境中的细菌,其基因组研究为理解微生物的环境适应性提供了重要模型。

其他有价值的内容

研究还探讨了Lactobacillus plantarum菌株的分类学关系,发现这些菌株可以分为两个明显的亚群(GLP1和GLP2),这与之前的传统分类方法一致。此外,研究还提出了关于基因组进化历史的复杂模型,强调了水平基因转移在细菌基因组进化中的重要性。

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