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一氧化氮、过氧化氢和钙在盐胁迫下对藜麦种子萌发阶段的交互作用

期刊:Plant Physiology and BiochemistryDOI:10.1016/j.plaphy.2020.07.022

类型a

研究作者与机构及发表信息
这篇研究由Shokoofeh Hajihashemi(伊朗Behbahan Khatam Alanbia科技大学植物生物学系)、Milan Skalicky、Marian Brestic和Vachová Pavla(捷克生命科学大学植物生理学系以及斯洛伐克农业大学植物学与植物生理学系)共同完成,并于2020年7月22日在线发表在《Plant Physiology and Biochemistry》期刊上。

学术背景
本研究主要探讨了盐胁迫对种子萌发的影响,以及如何通过外源化学物质的预处理来缓解这种影响。藜麦(Chenopodium quinoa)是一种高营养价值的作物,具有较强的耐盐性,但高盐浓度仍会抑制其种子萌发。种子萌发是作物生产成功的关键阶段,而这一阶段对盐胁迫非常敏感。为了提高藜麦种子在盐胁迫条件下的萌发能力,研究者探索了硝酸钠(SNP,一氧化氮供体)、过氧化氢(H₂O₂)和氯化钙(CaCl₂)单独或联合使用的效果。这些化学物质分别代表了一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)和钙离子(Ca²⁺),它们在植物应对逆境胁迫中起重要作用。

研究的主要目标是评估NO、H₂O₂和Ca²⁺在单一或组合条件下对藜麦种子耐盐性的改善效果,并揭示它们之间的相互作用机制。此外,研究还希望为农业生产中应对盐胁迫提供一种简单、低成本且低风险的技术。

研究流程
本研究包括以下几个主要步骤:

  1. 实验材料与预处理
    实验选用藜麦种子,将其用70%乙醇和10%次氯酸钠溶液进行表面灭菌后,分为不同处理组。预处理方法包括将种子分别浸泡在0、0.1和0.2 mM SNP、0、2.5和5 mM H₂O₂、0、2.5和5 mM CaCl₂或它们的组合(如0.1:2.5:2.5和0.2:5:5)中60分钟。每种处理设置10个重复,每个重复包含100粒种子。随后,将种子转移到含有0、50、100和200 mM NaCl的培养皿中,在25 ± 1°C的恒温生长室中培养,光周期为16小时光照和8小时黑暗,持续一周。

  2. 种子萌发参数测定
    每天记录各处理组种子的萌发情况,计算萌发率(GR)、相对萌发率(RSG)、萌发指数(GI)和平均萌发时间(MGT)。种子被定义为萌发的标准是胚根长度超过0.2 mm。

  3. 酶活性与代谢物测定
    在萌发48小时后收集种子样本,用于测定α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)和β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)的活性、可溶性蛋白含量、总氨基酸含量、水溶性糖(WSS)、葡萄糖和淀粉含量。具体实验方法包括:

    • 使用分光光度计测定α-淀粉酶和β-淀粉酶活性;
    • 使用Bradford法测定可溶性蛋白含量;
    • 使用茚三酮法测定总氨基酸含量;
    • 使用苯酚-硫酸法测定淀粉和水溶性糖含量;
    • 使用葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖浓度。
  4. 数据分析
    数据分析采用Statistica 13.0软件进行方差分析(ANOVA),并通过Dunnett检验确定处理组与对照组之间的显著差异(p < 0.05)。此外,使用Canoco 5软件进行主成分分析(PCA),以评估不同处理对种子萌发和代谢的影响。

主要结果
1. 种子萌发参数的变化
盐胁迫显著降低了藜麦种子的萌发率(GR)、相对萌发率(RSG)和萌发指数(GI),同时增加了平均萌发时间(MGT)。其中,200 mM NaCl对种子萌发的抑制作用最为显著。然而,SNP、H₂O₂和CaCl₂的预处理显著缓解了盐胁迫对种子萌发的不利影响。特别是三种物质的组合(5 mM CaCl₂、5 mM H₂O₂和0.2 mM SNP)不仅完全消除了盐胁迫的影响,还使种子萌发率高于对照组。

  1. 酶活性与代谢物的变化

    • α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性在盐胁迫下显著降低,但在预处理组中显著升高。这表明预处理促进了淀粉的分解,从而提高了水溶性糖和葡萄糖的含量。
    • 可溶性蛋白和总氨基酸含量在盐胁迫下显著增加,而预处理进一步增强了这一趋势。蛋白质和氨基酸的积累可能是种子应对盐胁迫的一种策略。
    • 预处理显著降低了盐胁迫种子中的淀粉含量,同时增加了水溶性糖和葡萄糖的含量。这些变化为种子萌发提供了必要的能量和营养。
  2. 相关性分析
    主成分分析显示,GR、RSG和GI与α-淀粉酶和β-淀粉酶活性、水溶性糖和葡萄糖含量呈正相关,而与淀粉含量呈负相关。这表明淀粉分解和代谢产物的积累是种子萌发的重要驱动力。

结论与意义
本研究表明,通过SNP、H₂O₂和CaCl₂的预处理可以有效缓解盐胁迫对藜麦种子萌发的不利影响。三种物质的协同作用显著提高了种子萌发率,并促进了淀粉分解和代谢产物的积累。研究结果不仅揭示了NO、H₂O₂和Ca²⁺在植物抗逆性中的关键作用,还为农业生产中应对盐胁迫提供了一种简单、低成本且低风险的技术。该技术的应用价值在于能够提高盐碱地作物的种植成功率,从而保障粮食安全。

研究亮点
1. 研究首次系统评估了NO、H₂O₂和Ca²⁺在缓解盐胁迫中的协同作用。
2. 实验设计严谨,涵盖了多种化学物质的单一和组合处理,全面揭示了它们的作用机制。
3. 数据分析方法先进,主成分分析为理解不同处理的效果提供了直观的视角。
4. 研究结果具有重要的理论意义和实际应用价值,为植物抗逆性研究和农业实践提供了新思路。

其他有价值内容
研究还发现,盐胁迫下种子中蛋白质和氨基酸的积累可能是植物应对逆境的一种普遍策略。此外,预处理不仅提高了种子的萌发率,还加速了幼苗的生长和建立,这对于作物在恶劣环境中的生存至关重要。

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