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比较蛋白质组学结合转基因植物分析揭示ZmREM1.3介导玉米对南方锈病的抗性

期刊:Plant Biotechnology JournalDOI:10.1111/pbi.13129

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主要作者及研究机构

该研究的主要作者包括Shunxi Wang、Zan Chen、Lei Tian、Yezhang Ding、Jun Zhang、Jinlong Zhou、Ping Liu、Yanhui Chen和Liuji Wu。研究机构包括河南农业大学的河南省粮食作物协同创新中心、河南省粮食作物生理生态与遗传改良重点实验室、加州大学圣地亚哥分校细胞与发育生物学系,以及河南省农业科学院谷物作物研究所。该研究于2019年发表在《Plant Biotechnology Journal》期刊上。

学术背景

该研究的主要科学领域是植物生物学与病原体互作,特别是玉米与南方锈病(Southern Corn Rust, SCR)的抗性机制。南方锈病是由真菌Puccinia polysora引起的,广泛发生在温带和热带地区,对玉米产量造成严重损失。尽管已有研究发现了与玉米抗病相关的数量性状位点(QTL),但具体的抗病基因尚未被克隆或鉴定。因此,本研究旨在通过比较蛋白质组学分析,鉴定与SCR抗性相关的候选蛋白,并阐明其分子机制。

研究流程

研究流程包括以下几个主要步骤:

  1. 实验材料与接种
    研究使用了两个玉米自交系:抗病的P178和感病的LX9801。植株在温室中生长至4-5叶期后,接种P. polysora孢子溶液。对照组使用模拟接种缓冲液。接种后,分别在0、2、4、6、8、10、12和14天采集叶片样本,用于后续分析。

  2. 蛋白质提取与iTRAQ标记
    从接种和模拟接种的叶片中提取总蛋白质,使用iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)标记技术进行定量蛋白质组学分析。每个实验组设置三个独立的生物学重复。

  3. 液相色谱-质谱联用分析
    使用Q Exactive质谱仪与Easy-nLC系统进行液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析,鉴定和定量蛋白质。

  4. 数据分析与功能注释
    使用Mascot搜索引擎对质谱数据进行数据库搜索,鉴定差异积累的蛋白质。通过GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库进行功能注释和通路富集分析。

  5. ZmREM1.3基因的表达分析与亚细胞定位
    通过qRT-PCR分析ZmREM1.3基因在不同组织中的表达模式,并构建ZmREM1.3-GFP融合蛋白载体,进行亚细胞定位实验。

  6. 转基因植株的构建与表型分析
    将ZmREM1.3基因插入到玉米基因组中,构建转基因植株。通过Western blot验证ZmREM1.3蛋白的表达,并观察转基因植株对P. polysora的抗性表型。

  7. 激素与防御基因表达分析
    检测转基因植株中水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)的含量,并分析防御相关基因的表达水平。

主要结果

  1. 差异蛋白质组学分析
    在抗病和感病玉米系中分别鉴定到1489和1035个差异积累的蛋白质。抗病系中ZmREM1.3蛋白的丰度显著增加,而感病系中则显著降低。

  2. ZmREM1.3的表达与定位
    ZmREM1.3基因在玉米的各个组织中均有表达,且在抗病系中受P. polysora感染后表达上调。亚细胞定位实验显示ZmREM1.3蛋白定位于细胞膜。

  3. 转基因植株的抗病性
    过表达ZmREM1.3的转基因植株表现出对P. polysora的增强抗性,而ZmREM1.3突变体植株则表现出更高的感病性。

  4. 激素与防御基因的作用
    转基因植株中SA和JA的含量显著增加,且防御相关基因(如AOS、HPL、ECA和PR4)的表达水平显著上调。

结论

该研究表明,ZmREM1.3通过调控SA/JA介导的防御信号通路,正向调节玉米对P. polysora的抗性。这一发现为理解玉米与病原体的互作机制提供了新的见解,并为培育抗病玉米品种提供了潜在的遗传资源。

研究亮点

  1. 首次大规模蛋白质组学分析
    该研究首次对玉米与P. polysora互作的分子机制进行了大规模蛋白质组学分析,鉴定出多个与抗病相关的差异积累蛋白质。

  2. ZmREM1.3的功能鉴定
    该研究首次证实了ZmREM1.3在玉米抗病中的重要作用,并阐明了其通过SA/JA信号通路调控抗病性的分子机制。

  3. 转基因植株的应用潜力
    过表达ZmREM1.3的转基因植株表现出显著的抗病性,为玉米抗病育种提供了新的遗传资源。

其他有价值的内容

该研究还探讨了光合作用和氨基酸代谢在玉米抗病中的变化,发现抗病系通过保护光合作用机制维持了较高的光合效率,而感病系则表现出光合作用的下调和氨基酸代谢的增强。这些结果为理解植物抗病的代谢调控提供了新的视角。

该研究通过结合蛋白质组学、遗传学、生化和生理实验,系统阐明了ZmREM1.3在玉米抗病中的关键作用,具有重要的科学和应用价值。

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