本研究由郭文文(西藏农牧学院高原生态研究所/西藏大学生态环境学院)、卓么草(派镇农牧综合服务中心)、韩嘉华和方江平(西藏大学生态环境学院)合作完成,发表于《河南农业科学》2024年第53卷第6期。论文题为《色季拉山杜鹃花属植物叶片解剖结构特征与抗逆性评价》,聚焦青藏高原特殊生境下杜鹃花属植物的适应性进化机制研究。
杜鹃花属(Rhododendron L.)作为北半球最大的木本植物属,全球约1000种,中国分布超600种,既是重要观赏资源,又在水土保持中发挥关键作用。色季拉山地处青藏高原东南缘,具有强辐射、低温和缺氧等极端环境特征,是研究植物环境适应策略的理想区域。尽管前人已对杜鹃花属的资源分布、遗传多样性及药理作用开展研究,但针对同域分布近缘种的叶片解剖结构种间差异及其抗逆性机制的系统研究仍属空白。本研究旨在通过解剖学特征揭示5种杜鹃花的环境适应策略,为高原杜鹃花种质资源利用提供理论依据。
2023年7月,研究团队在色季拉山设置5个20m×20m样地,分别采集散鳞杜鹃(R. bulu, RBH)、雪山杜鹃(R. aganniphum, RAB)、林芝杜鹃(R. nyingchiense, RNR)、雪层杜鹃(R. nivale, RNH)和黄杯杜鹃(R. wardii, RWW)的成熟叶片。每物种选取3株健康个体,每株采集阳面完整叶片5片,立即用FAA固定液(福尔马林:冰醋酸:甘油:50%乙醇=5:5:5:90)保存。
采用全自动石蜡切片技术:①梯度乙醇脱水;②二甲苯透明;③石蜡浸蜡包埋;④ERM4000切片机切割10μm厚度切片;⑤番红-固绿双重染色。使用尼康Eclipse 80i显微镜拍摄切片,Leica Application Suite X软件测量7项直接指标:上角质层厚度(luct)、上表皮厚度(luet)、栅栏组织厚度(lpmt)、海绵组织厚度(lsmt)、下表皮厚度(llet)、主脉直径(lmvd)、叶片总厚度(llt),并计算4项衍生指标:组织结构紧密度(lpmt/lt)、疏松度(lsmt/lt)、栅海比(lpmt/smt)、主脉突起度(lmpd)。每物种测量10张切片,获得20组数据。
通过SPSS 26进行单因素方差分析(ANOVA)和Duncan多重比较检验种间差异,采用主成分分析(PCA)筛选抗逆性关键指标,最后通过隶属函数法综合评价抗逆性。正相关指标采用公式C(yk)=(yk-ymin)/(ymax-ymin),负相关指标采用1-(yk-ymin)/(ymax-ymin)计算隶属值。
相关性分析
海绵组织比例(lsmt/lt)与栅海比(lpmt/smt)呈极显著负相关(p<0.01),与栅栏组织比例(lpmt/lt)显著负相关(p<0.05),表明叶肉组织分化存在协同调控。
抗逆性评价指标
PCA分析显示前3主成分累计贡献率90.498%,筛选出5个核心指标:下表皮厚度(llet)、海绵组织厚度(lsmt)、组织结构紧密度(lpmt/lt)、栅海比(lpmt/smt)和主脉突起度(lmpd)。
抗逆性排序
隶属函数法综合评价结果为:RNH(0.5471)> RWW(0.5262)> RBH(0.4133)> RNR(0.4118)> RAB(0.4114)。雪层杜鹃表现出最强的环境适应能力。
本研究首次系统揭示了色季拉山5种杜鹃花叶片解剖结构的环境适应策略:
1. 科学价值:证实高海拔杜鹃花通过增厚角质层(RNH达7.92μm)、多层栅栏组织(RAB达4~5层)及特化表皮结构(乳突/表皮毛)应对强辐射和低温胁迫,为植物适应性进化研究提供新案例。
2. 应用价值:雪层杜鹃(RNH)可作为高抗逆性育种材料,其高栅海比(1.80)和主脉突起度(3.64)特征可作为早期选育的解剖标记。
3. 方法创新:建立基于PCA-隶属函数法的木本植物抗逆性评价体系,克服单一指标局限性。
该研究填补了藏东南高山杜鹃功能生态学研究的空白,其建立的抗逆性评价框架可推广至其他极端环境植物研究。后续建议结合生理生化指标(如抗氧化酶活性)及分子机制开展多尺度验证。