该研究由韩国Eulji大学医学院生物化学与分子生物学系的Ki-Ho Lee和Nan Hee Kim合作完成，研究成果发表于2018年3月的《Development & Reproduction》期刊（Vol. 22, No. 1, 29-38），DOI号为10.12717/dr.2018.22.1.029。论文题为《Expressional patterns of connexin isoforms in the rat epididymal fat during postnatal development》，聚焦于连接蛋白（connexin, Cx）在大鼠附睾脂肪组织 postnatal development（出生后发育）过程中的表达模式。
连接蛋白是构成间隙连接（gap junction）的核心组件，介导细胞间小分子物质（如信号分子、代谢物和RNA）的直接交换，对多细胞组织的功能协调至关重要。哺乳动物已发现20种Cx亚型，其表达具有组织特异性。尽管Cx在睾丸和附睾中的表达已有研究，但附睾脂肪组织中Cx亚型的表达模式及其在发育过程中的动态变化尚未被探索。附睾脂肪作为 perigonadal white adipose tissue（性腺周围白色脂肪组织）的重要组成部分，其重量随年龄增长可增加数百倍，但这一过程中分子层面的调控机制，尤其是Cx的潜在作用仍属未知。本研究首次系统检测了13种Cx亚型在大鼠附睾脂肪从新生儿期（7天）到老年期（2岁）的转录水平变化，旨在揭示Cx在脂肪组织发育中的可能功能。
实验动物与组织采集
使用Sprague Dawley大鼠，按年龄分为7天（n=10）、14天（n=10）、24天（n=8）、44天（n=7）、5个月（n=5）、1年（n=3）和2年（n=3）组。通过CO2麻醉后解剖获取附睾脂肪组织，去除嵌入的 efferent ductules（输出小管），液氮速冻保存于-80℃。
RNA提取与cDNA合成
采用Easy-Blue总RNA提取试剂盒（Intron Biotech）从20 mg组织中提取RNA，经氯仿-异丙醇纯化后，用Nanodrop Lite分光光度计定量。使用Improm-II逆转录系统（Promega）以1 μg RNA合成cDNA，反应条件为25℃ 5分钟、42℃ 90分钟、70℃ 15分钟。
定量实时PCR分析
设计13种Cx亚型（最终检出11种，排除未表达的Cx30和Cx30.1）及内参β-actin（ACTB）的特异性引物（表1）。采用SYBR Green Supermix（Bio-Rad）在CFX96 thermocycler上运行PCR程序：95℃预变性5分钟，95℃ 30秒→Tm 30秒→72℃ 30秒循环40次，72℃延伸10分钟。每个年龄组设4次生物学重复，数据以2^(-ΔΔCt)法计算相对表达量，通过单因素ANOVA和Duncan事后检验分析差异（p<0.05）。
Cx表达的年龄依赖性变化
亚型特异性表达模式
本研究首次揭示了大鼠附睾脂肪中11种Cx亚型的动态表达谱，表明Cx可能通过调控细胞间通讯参与脂肪组织的年龄依赖性功能重塑。关键科学价值包括：
1. 理论层面：为脂肪组织发育的分子机制提供了新视角，提示Cx介导的间隙连接可能影响脂肪细胞增殖/分化（如Cx43通过调控C/EBPβ参与 adipogenesis（脂肪生成））。
2. 应用潜力：老年期Cx的普遍上调可能与年龄相关代谢疾病（如动脉粥样硬化）有关，为相关治疗靶点开发提供线索。
3. 领域突破：填补了附睾脂肪中Cx研究的空白，后续需明确具体细胞来源（如 adipocyte（脂肪细胞） vs. stromal vascular fraction（基质血管组分））及调控机制。
研究指出附睾脂肪可能通过分泌 leptin（瘦素）和 adiponectin（脂联素）等因子调控睾丸生精功能，而Cx的表达变化或参与这一过程。此外，雌激素受体α（ERα）敲除小鼠的附睾脂肪增重现象提示性激素可能通过调控Cx影响脂肪发育，值得进一步探索。