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利用单核壳纳米线电极实时测量活细胞内活性氧和活性氮

期刊:Angewandte ChemieDOI:10.1002/anie.201707187

单核-壳纳米线电极实时检测活细胞内活性氧/氮物种的研究报告

作者及发表信息

本研究由Xin-Wei Zhang、Quan-Fa Qiu、Hong Jiang、Fu-Li Zhang、Yan-Lin Liu、Christian Amatore*及Wei-Huang Huang*合作完成,作者单位包括武汉大学化学与分子科学学院(中国)、厦门大学固体表面物理化学国家重点实验室(中国)以及法国巴黎高等师范学院。研究成果发表于《Angewandte Chemie International Edition》(国际版DOI: 10.1002/anie.201707187;德国版DOI: 10.1002/ange.201707187),2017年9月正式在线发表。

学术背景

研究领域:本研究属于生物电化学与纳米传感技术的交叉领域,聚焦于活细胞内活性氧/氮物种(ROS/RNS, Reactive Oxygen/Nitrogen Species)的实时定量检测。

研究动机:细胞内ROS/RNS的动态变化与氧化应激、免疫防御等生理病理过程密切相关,但传统检测方法受限于空间分辨率(如荧光探针)或侵入性(如微电极穿刺损伤)。纳米电极因其高时空分辨率(飞升级空间、毫秒级时间)和低细胞毒性,成为解决这一问题的理想工具。然而,现有纳米电极(如针状或盘状)存在机械强度不足、难以深层穿透细胞等问题。

研究目标:开发一种兼具优异机械性能与电化学活性的圆柱形核-壳纳米线电极(NWEs, Nanowire Electrodes),实现活细胞内亚细胞器(如吞噬溶酶体)中ROS/RNS的原位定量检测。

研究流程

1. 核-壳纳米线电极的制备

材料设计:以碳化硅(SiC)纳米线为核心,通过化学气相沉积(CVD, Chemical Vapor Deposition)在其表面包覆超薄碳壳(厚度50-100 nm),形成SiC@C核-壳结构。SiC提供机械韧性(可弯曲恢复),碳壳赋予电化学活性。

组装工艺
- 步骤1:用纳米移液管拾取SiC纳米线,通过CVD沉积碳层。
- 步骤2:将碳包覆的纳米线转移至第二根纳米移液管,注入液态金属确保电接触,并用蜡密封固定。
- 步骤3:根据需求选择性铂化(Platinization)碳壳表面(用于增强ROS/RNS检测灵敏度)。
创新点:该方法成功率>85%(n=160),单电极制备时间约20分钟,且可通过调整SiC直径(200-500 nm)和碳层厚度定制电极尺寸。

2. 电极性能验证

机械测试:SiC@C纳米线可弹性弯曲(推压玻璃壁后恢复原状),且弯曲后电化学性能不变(循环伏安法验证)。
电化学测试:以1 mM Ru(NH₃)₆³⁺/1 M KCl为模型体系,连续50次循环伏安扫描显示稳定响应(电流振幅、峰形、半波电位一致性)。

3. 细胞内检测实验

细胞模型
- HeLa细胞(验证电极穿透性与细胞存活率):插入电极后,细胞膜可紧密包裹电极 shaft,且撤出后96%电流响应恢复(n=10)。
- RAW 264.7巨噬细胞(检测吞噬溶酶体ROS/RNS):巨噬细胞吞噬病原体后,吞噬溶酶体内产生ROS/RNS(如H₂O₂、NO)。

检测方法
- 铂化SiC@C电极:电位设定为0.85 V(vs. Ag/AgCl),记录电流瞬变峰(对应吞噬溶酶体破裂释放ROS/RNS)。
- 对照实验:非铂化电极或低电位下无电流峰;Hela细胞(无ROS/RNS囊泡)同样无响应。

数据分析:统计427个电流峰(来自5个巨噬细胞),计算电荷量(Q)、峰值电流(Iₘₐₓ)和半衰期(t₁/₂)。结果显示,每个吞噬溶酶体平均含31,250-62,500个ROS/RNS分子(基于法拉第定律)。

主要结果

  1. 电极性能:SiC@C纳米线直径300-500 nm时,穿透细胞膜后细胞存活率100%(n=30,Calcein-AM/PI染色验证)。
  2. 检测灵敏度:铂化碳壳对H₂O₂氧化的电流响应较纯碳壳提升10倍。
  3. 动态过程捕捉:电流瞬变峰反映单个吞噬溶酶体的破裂事件,其电荷量呈对数正态分布,与溶酶体成熟度异质性一致。

结论与意义

科学价值
- 方法学突破:首次实现活细胞吞噬溶酶体内ROS/RNS的定量检测,为亚细胞器水平氧化应激研究提供新工具。
- 技术普适性:碳壳可替换为其他电活性材料(如金、钯),扩展至其他分子检测。

应用潜力
- 免疫学研究:揭示巨噬细胞杀菌机制中ROS/RNS的时空动态。
- 疾病模型:应用于神经退行性疾病(如阿尔茨海默症)中氧化损伤的实时监测。

研究亮点

  1. 核-壳设计创新:SiC核心与碳壳的结合解决了纳米电极机械强度与电活性的矛盾。
  2. 单细胞分辨率:首次定量测定单个吞噬溶酶体的ROS/RNS含量,空间分辨率达飞升级。
  3. 低侵入性:圆柱形电极最小化细胞损伤,膜穿孔后可自密封。

其他价值

  • 跨学科合作:融合半导体材料(SiC)、电化学(铂化)和细胞生物学(吞噬溶酶体模型)。
  • 开源协议:支持信息中详细公开电极制备协议,促进方法推广。

(注:文中专业术语如“phagolysosomes”译为“吞噬溶酶体”,“cyclic voltammograms”译为“循环伏安图”)

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