受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1，Receptor-interacting protein kinase 1）在细胞程序性坏死（necroptosis）过程中发生异常激活，进而促进并加剧炎症反应。抑制RIPK1激酶活性被认为是治疗与necroptosis相关的免疫介导性炎症疾病的重要靶点。近期，由Qiangqiang Tao、Xixiang Li、Hongwei Yu等作者团队在*Journal of Medicinal Chemistry*（2025年10月）发表了一项研究，报道了一种新型、高选择性、口服可用的1H-吡唑-3-胺衍生物（化合物44）作为RIPK1抑制剂，用于治疗炎症性疾病。

一、研究背景与目标

RIPK1是necroptosis信号通路（RIPK1-RIPK3-MLKL轴）的核心调控蛋白。当肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）或干扰素（IFN）等死亡受体被炎症因子激活时，RIPK1的激酶活性驱动下游信号级联，最终导致细胞坏死并释放损伤相关分子模式（DAMPs），引发炎症反应。这种机制与炎症性肠病（IBD）、系统性炎症反应综合征（SIRS）等疾病密切相关。此外，癌细胞可通过劫持RIPK1抑制necroptosis以逃避免疫监视，因此靶向RIPK1的抑制剂或降解剂具有双重治疗潜力。

尽管已有多种RIPK1抑制剂进入临床试验（如GSK2982772、Nec-1s等），但其结合模式（如I型、II型或III型）和选择性仍需优化。本研究以临床阶段FGFR抑制剂AZD4547为起点，通过结构优化和构效关系（SAR）研究，设计出一类新型1H-吡唑-3-胺衍生物，旨在开发兼具高活性、高选择性和良好药代动力学特性的RIPK1抑制剂。

二、研究方法与流程

1. 结构设计与分子对接

研究团队基于AZD4547与RIPK1的分子对接模型（PDB: 4NEU），发现AZD4547以II型抑制剂模式结合RIPK1的DLG-out构象，占据ATP结合区和变构口袋。通过分析结合位点差异，团队提出三个关键修饰区域：
- 区域I：用苯并吗啉替代乙基，增强与铰链区（Glu93、Met95）的氢键作用。
- 区域II：引入疏水取代基（如2,5-二氟苯基）以填充变构口袋（Met67、Leu129等）。
- 区域III：优化溶剂前沿结构（如二氢哒嗪环）以提高溶解度和选择性。

2. 构效关系（SAR）研究

通过ADP-Glo激酶活性检测和TSZ（TNF-α/BV6/z-VAD-fmk）诱导的HT-29细胞necroptosis模型，团队系统评估了衍生物的活性：
- 区域I优化：苯并吗啉衍生物（14）表现出显著活性（IC50 = 17.9 nM），而吡啶类似物（15）活性下降。
- 区域II优化：2-氟-5-异丙氧基苯基衍生物（26）活性最佳（IC50 = 4.89 nM；EC50 = 1.30 nM）。
- 区域III优化：甲基磺酰苯基（34）和杂环衍生物（40）展现出高活性和选择性。

3. 药代动力学优化

初步筛选后，团队对候选化合物（26、33、40）进行大鼠药代动力学评估。化合物40表现出良好的半衰期（t1/2 = 4.59 h）和口服生物利用度（F% = 25.5%）。进一步通过氘代甲基（CD3）和二氟甲氧基（CHF2）取代（化合物44），显著提升AUC（17660 ng·h/mL）和生物利用度（96%）。

4. 选择性及机制验证

• 激酶组选择性：化合物44在219种激酶中仅对RIPK1和原肌球蛋白相关激酶（TRKA/B/C）有显著抑制（1 μM浓度下）。
  
• 细胞模型：44有效抑制人源U937和小鼠L929细胞的necroptosis（EC50分别为18.1 nM和11.5 nM）。
  
• Western blot：44剂量依赖性抑制RIPK1、RIPK3和MLKL的磷酸化，证实其通过阻断RIPK1-RIPK3-MLKL轴发挥作用。
  

三、主要研究结果

1. 体外活性：化合物44对RIPK1的IC50为5.33 nM，且在HT-29细胞中EC50为9.98 nM。
   
2. 体内疗效：
   
   • SIRS模型：口服44（10 mg/kg）完全阻止TNF-α诱导的小鼠体温下降和死亡。
     
   • IBD模型：44显著缓解DSS诱导的结肠缩短和炎症浸润（H&E染色证实）。
     
3. 药代特性：44在小鼠中表现出高暴露量（AUC = 20074 ng·h/mL）和96%的生物利用度。
   

四、研究意义与创新点

1. 科学价值：首次报道基于AZD4547骨架的II型RIPK1抑制剂，填补了变构口袋靶向抑制剂的空白。
   
2. 临床应用潜力：化合物44的口服活性和高选择性为IBD、SIRS等炎症性疾病提供了新治疗策略。
   
3. 方法学创新：通过氘代和氟化策略优化代谢稳定性，为激酶抑制剂设计提供新思路。
   

五、研究亮点

• 高选择性：44对RIPK3无抑制，避免潜在副作用。
  
• 跨物种活性：同时有效抑制人和小鼠细胞necroptosis。
  
• 结构新颖性：1H-吡唑-3-胺骨架为首次应用于RIPK1抑制剂领域。
  

六、总结

该研究通过理性设计和多维度优化，开发出化合物44这一具有临床转化潜力的RIPK1抑制剂。其卓越的激酶选择性、体内外活性及药代特性，为炎症性疾病的治疗提供了新的候选药物，并为靶向necroptosis通路的药物研发树立了范例。