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主要作者及研究机构
本研究由Mengguo Liu、Ji Yang、Xiaojing Xing、Xiangxiang Cui和Ming Li共同完成，研究机构为复旦大学附属中山医院皮肤科。该研究于2014年发表在期刊《Arthritis Research & Therapy》上，文章编号为16:4223。
学术背景
系统性硬化症（Systemic Sclerosis, SSc）是一种严重的结缔组织疾病，其病因尚未明确。SSc的病理特征包括微血管病变、成纤维细胞胶原合成增加以及免疫异常。其中，微血管病变是SSc最早期的临床表现之一，涉及皮肤、肺、心脏和肾脏的小动脉和微动脉。研究表明，Th17细胞及其相关细胞因子，特别是白细胞介素-17A（Interleukin-17A, IL-17A），在SSc的发病机制中起重要作用。然而，IL-17A对SSc患者皮肤血管平滑肌细胞（Dermal Vascular Smooth Muscle Cells, DVSMCs）的影响尚未明确。本研究旨在探讨IL-17A对SSc患者来源的DVSMCs的功能激活作用及其分子机制。
研究流程
研究分为多个步骤，详细流程如下：
研究对象及样本采集
研究纳入了16名SSc患者（6名男性，10名女性，平均年龄43.6岁）和15名健康对照者（7名男性，8名女性，平均年龄40.7岁）。所有SSc患者均符合美国风湿病学会的分类标准，且处于疾病活动期。从SSc患者的病变皮肤和健康对照者的正常皮肤中分离出DVSMCs。
DVSMCs的分离与鉴定
采用改良的Sung Tae Cha等方法从皮肤中分离DVSMCs。通过免疫荧光染色和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、肌球蛋白重链（Myosin）和钙调蛋白（Calponin）的表达，以鉴定DVSMCs的纯度。
细胞培养与刺激
将DVSMCs接种于6孔板中，分别用不同浓度的重组人IL-17A（1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL）或SSc患者血清（5%）进行刺激。同时，使用IL-17A中和抗体（8 μg/mL）或ERK1/2抑制剂PD98059（10 μM/mL）预处理细胞，以探讨IL-17A的作用机制。
细胞增殖、胶原合成与迁移检测
使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞增殖；通过双荧光素酶报告基因实验、实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测胶原1和胶原3的合成与分泌；通过Transwell实验检测细胞迁移。
信号通路分析
使用Western blot检测IL-17A刺激后DVSMCs中ERK1/2、JNK和p38 MAPK的磷酸化水平，以确定IL-17A激活的信号通路。
主要结果
1. IL-17A促进DVSMCs的增殖
IL-17A和SSc患者血清显著促进了DVSMCs的增殖，且IL-17A中和抗体抑制了这种增殖效应。
IL-17A诱导胶原合成与分泌
IL-17A和SSc患者血清显著增加了胶原1和胶原3的mRNA表达和蛋白质分泌，且IL-17A中和抗体抑制了这种效应。
IL-17A通过ERK1/2信号通路激活DVSMCs
IL-17A显著增加了DVSMCs中ERK1/2的磷酸化水平，而ERK1/2抑制剂PD98059抑制了IL-17A诱导的DVSMCs功能激活。
IL-17A促进DVSMCs的迁移
IL-17A和SSc患者血清显著增加了DVSMCs的迁移能力，且IL-17A中和抗体或ERK1/2抑制剂抑制了这种迁移效应。
结论
本研究表明，SSc患者血清中的IL-17A通过ERK1/2信号通路诱导DVSMCs的增殖、胶原合成与分泌以及迁移，从而在SSc相关微血管病变中起重要作用。这一发现为SSc的治疗提供了新的潜在靶点，即通过抑制IL-17A或ERK1/2信号通路来缓解SSc的血管病变。
研究亮点
1. 重要发现
首次揭示了IL-17A在SSc患者DVSMCs功能激活中的关键作用，并明确了ERK1/2信号通路在这一过程中的核心地位。
方法创新
采用改良的DVSMCs分离方法，并结合多种实验技术（如双荧光素酶报告基因实验、Transwell实验等）全面评估了IL-17A对DVSMCs的影响。
研究意义
该研究不仅为SSc的发病机制提供了新的理论依据，还为开发针对IL-17A或ERK1/2信号通路的治疗策略奠定了实验基础。
其他有价值的内容
研究还探讨了IL-17A在其他疾病（如哮喘、动脉粥样硬化）中的作用，为理解IL-17A在不同病理条件下的功能提供了参考。此外，研究强调了Th17细胞及其相关细胞因子在自身免疫性疾病中的广泛作用，为进一步研究提供了方向。