学术报告：Changyanning Tablet 研究

作者与研究发表信息

本文的主要作者包括 Ying Huang、Qing Ru、Jing Zhang、Chuang Wang 等，研究分别由他们所在的单位支持完成，包括中国中医科学院中药资源利用与功能物质研究联合实验室（主营地为北京），以及江西康恩贝中药有限公司。本文发表在 Journal of Ethnopharmacology 期刊上，研究成果的 DOI 为 https://doi.org/10.1016/j.jep.2025.119415。文章接收于 2024 年 12 月 17 日，修订于 2025 年 1 月 23 日，并于 2025 年 1 月 25 日上线。

学术背景与研究目的

科学领域与研究背景

本研究关注领域为中医药的开发及其对现代炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease，IBD）如克罗恩病（Crohn’s Disease，CD）的治疗效用。当前尽管已有多种治疗 IBD 和 CD 的手段，但疗效有限，副作用较多，例如糖皮质激素会导致骨质疏松和高血糖，5-氨基水杨酸（mesalazine）可能引起肾毒性和胰腺毒性等问题。此外，许多患者需要长期用药维持病情缓解，这往往伴随药物耐受性和副作用增加。

Changyanning Tablet 是一种传统中成药，由五种中药材组成，包括地锦草（Euphorbia humifusa Willd.）、金毛耳草（Hedyotis chrysotricha (Palib.) Merr.）、樟树根（Cinnamomum camphora (L.) J. Presl）、香薷（Elsholtzia ciliate (Thunb.) Hyland）、枫香树叶（Liquidambar formosana Hance）。其被广泛用于治疗与湿热相关的腹泻、痢疾等胃肠疾病，但其是否对 CD 具有干预功效仍未有深入研究。

研究目标

本研究旨在探讨 Changyanning Tablet 对 CD 的干预效果，并深入揭示其潜在作用机制，特别是是否能够通过抑制 GPX4（Glutathione Peroxidase 4）介导的铁死亡（Ferroptosis）减轻 CD 症状。

研究流程与实验方法

总体设计

研究以 TNBS（2,4,6-三硝基苯磺酸）建立大鼠 CD 模型，通过一系列体内和体外实验验证 Changyanning Tablet 抑制铁死亡的效果，并依托现代化学分析技术（如 UPLC-MS）鉴别关键活性成分。研究共包括以下几个关键步骤：

1. 动物模型的构建与药效评估

   • 加入 69 只 Wistar 大鼠，随机分为对照组、假手术组、TNBS 组、Changyanning Tablet 低剂量（200 mg/kg）组、中剂量（500 mg/kg）组、高剂量（1000 mg/kg）组，以及中西医对照组（200 mg/kg Mesalazine）。
   • TNBS 结合乙醇灌肠建立 CD 动物模型，每组定期监测体重、排便情况（如隐血及形态）以评估疾病活动指数（Disease Activity Index, DAI）。结肠组织取样后分析长度变化、病理形态（HE 染色）、炎症因子 mRNA 表达（TNF-α、IL-6）及屏障相关蛋白（Occludin、Claudin-1）表达情况。

2. 体外研究主要靶点的筛选

   • 利用 HCoEpiC（人结肠上皮细胞系），使用三种铁死亡诱导剂：RSL3（靶向 GPX4）、FINO2（铁氧化引发脂质过氧化）及 Erastin，分别测试 Changyanning Tablet 对细胞存活率的提升效果。后续配合 GPX4-knockdown 技术进行靶点反验证。

3. 活性成分筛选及分离

   • 使用 UPLC-MS 鉴定 Changyanning Tablet 中化学成分，并结合体外实验验证其主要活性成分（三种候选化学成分的铁死亡抑制活性）。

数据分析

所有数据使用 GraphPad Prism 进行统计分析，采用方差分析（ANOVA）、T 检验、卡方检验等方法评估组间显著差异。

研究主要结果

Changyanning Tablet 对 TNBS 诱导 CD 的治疗作用

• 生存率与体重变化：TNBS 模型中生存率显著下降，但经 Changyanning Tablet 处理后存活率显著改善，体重恢复亦优于 TNBS 对照组。
• DAI评分及大体形态：DAI 评分显示，Changyanning Tablet 和 Mesalazine 均能降低病变组评分；结肠长度减缩现象因药物处理而减轻。
• 病理组织学分析：TNBS 组出现范围广泛的结肠黏膜坏死与炎症细胞渗透，而 Changyanning Tablet 对于结肠病理改变如黏膜缺失、炎症微环境显著改善。
• 炎症及屏障蛋白表达：Changyanning Tablet 显著降低 TNF-α 和 IL-6 mRNA 表达，同时恢复 Occludin 与 Claudin-1 蛋白表达水平。

Ferroptosis 相关指标的改善

在 TNBS 大鼠模型中，Changyanning Tablet 显著上调 GSH（谷胱甘肽）水平，下调 MDA（丙二醛）浓度，并恢复 Slc7a11 和 GPX4 蛋白表达，这表明其干预效应可能是通过调控铁死亡的核心分子实现的。

Changyanning Tablet 在 RSL3 模型中的抗铁死亡验证

• Changyanning Tablet 显著降低 RSL3 诱导的细胞凋亡率及 ROS（活性氧）生成，改善 Fe²⁺ 和 MDA 的异常累积。
• GPX4 被 knockdown 后，Changyanning Tablet 的保护效用有所弱化，但仍显示一定抗铁死亡效力。

主要活性成分筛选及作用验证

UPLC-MS 鉴定出 14 种成分，其中 Rutin（芦丁）、Rosmarinic Acid（迷迭香酸）及 Kaempferol-3-O-Sophoroside（山柰酚-3-O-伴水苏糖苷）是 Changyanning Tablet 中的核心抗铁死亡成分，能显著抵抗 RSL3 的诱导效应。

研究结论与意义

本研究首次基于 TNBS 模型证实，Changyanning Tablet 可通过抑制 GPX4-介导的 Ferroptosis 显著缓解 CD 症状，为其实际治疗应用提供了科学依据。此外，通过识别核心活性成分如 Rutin、Rosmarinic Acid 和 Kaempferol-3-O-Sophoroside，本研究为该药物的现代化开发奠定了基础。未来，Changyanning Tablet 及相关活性成分有望成为治疗 CD 的潜在新药或药物组合，为中医药在国际范围内的应用与推广提供了新方向。

研究亮点与创新点

1. 首次揭示 GPX4-介导的 Ferroptosis 在 Changyanning Tablet 干预 CD 症状中的关键作用。
2. 综合采用体内外联合研究设计，验证药效及潜在机制。
3. 通过高通量技术（UPLC-MS）明确核心活性成分，实现传统中药研究与现代药学技术的深度结合。

未来研究方向

由于 Changyanning Tablet 的干预机制及其多组分特点，进一步研究需关注以下几点： 1. 深化 GPX4 相关信号通路中的分子机制。 2. 开展大样本量、多物种、多剂量的实验验证。 3. 探讨与现代制剂技术的结合，以提高药物靶向性及生物利用度。同时，需积极推进临床试验，确保其长效安全性。