抗糖化复合物EBB的皮肤保护作用及其机制研究
一、研究团队与发表信息
本研究由北京清颜博仕健康管理有限公司的Chang Sun、Zibin Liu、Yanfei Jiang、Chunyue Zhao团队，联合北京大学公共卫生学院的Junbo Wang团队共同完成，成果发表于《Phytomedicine》期刊2025年第140卷（文章编号156592）。论文于2025年3月12日在线发表，标题为《Mixtures of EGCG, bamboo leaf flavonoids, and broccoli seed water extracts exhibit anti-glycation and skin-protective effects》。
二、学术背景与研究目标
科学领域：本研究属于天然产物药理学与皮肤衰老交叉领域，聚焦于晚期糖基化终末产物（Advanced Glycation End-products, AGEs）的抑制策略。
研究背景：皮肤衰老受内源性（如糖化反应）和外源性（如紫外线）因素驱动。AGEs通过激活RAGE受体（Receptor for AGEs）触发炎症和氧化应激，导致胶原损伤和皮肤功能退化。目前，天然成分的抗糖化潜力备受关注，但多成分协同机制尚不明确。
研究目标：开发一种由表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（EGCG）、竹叶黄酮（bamboo leaf flavonoids）和西兰花种子水提物（broccoli seed water extracts）组成的复合物EBB，通过细胞和动物模型评估其抗糖化效果，并揭示其分子机制。
三、研究流程与方法
1. 成分鉴定与体外模型构建
- 成分分析：采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）和高效液相色谱（HPLC）鉴定EBB的主要活性成分，包括西兰花种子中的萝卜硫苷（glucoraphanin, 25.1%）、芥子碱（sinapine, 0.1%）和竹叶黄酮中的荭草苷（orientin, 0.8%）。
- 细胞模型：以人永生化角质形成细胞（HaCaT）为对象，建立三种糖化模型：
- 甘油醛（GLA）诱导模型：700 μM GLA处理24小时；
- 甲基乙二醛（MGO）诱导模型：2 mM MGO处理；
- AGEs直接刺激模型：200 μg/mL AGE-BSA处理。
- 抗糖化检测：通过ELISA测定细胞内AGEs和羧甲基赖氨酸（CML）水平，发现EBB（低剂量组：EGCG 2 μg/mL + 西兰花提取物440 μg/mL + 竹叶黄酮12 μg/mL）显著抑制AGEs生成（如GLA模型中AGEs降低至90.36%）。
2. 转录组学与机制探索
- RNA测序：对比GLA处理组与EBB干预组的基因表达差异，发现576个差异表达基因（DEGs），富集于细胞外基质（ECM）重构、慢性炎症和MAPK/NF-κB通路。关键基因ROS1（一种酪氨酸激酶受体）在糖化组中表达上调，而EBB可逆转此效应。
- 蛋白验证：Western blot显示EBB下调RAGE、p-p38、p-ERK1/2和TNF-α的表达，表明其通过抑制ROS1-RAGE-MAPK/NF-κB轴减轻炎症反应。
3. 体内实验验证
- 斑马鱼模型：在葡萄糖和紫外线诱导的糖化模型中，EBB（6.25 μg/mL）使AGEs水平分别降至101.96%和109.68%，优于阳性对照氨基胍（AG）。
- 小鼠模型：通过皮下注射D-半乳糖（D-gal）联合紫外线（UVA/UVB）照射诱导皮肤衰老。EBB（90 mg/kg）处理8周后：
- 皮肤参数改善：AGE评分下降50%，皮肤弹性（回缩时间缩短）、水合度提升；
- 组织学分析：Masson染色显示胶原纤维排列更紧密，炎症浸润减少；
- 抗氧化指标：皮肤和血清中SOD活性升高，MDA（丙二醛）含量降低。
四、主要结果与逻辑链条
1. 成分协同效应：EBB中EGCG捕获活性羰基，竹叶黄酮清除自由基，西兰花提取物调节炎症，三者协同抑制AGEs形成。
2. 机制递进验证：
- 体外实验证明EBB直接减少AGEs积累；
- 转录组学发现ROS1和炎症通路的关键作用；
- 体内实验证实其改善皮肤结构和功能。
3. 跨模型一致性：细胞、斑马鱼和小鼠结果均支持EBB通过RAGE-ROS1-MAPK通路发挥抗糖化作用。
五、结论与价值
科学价值：首次阐明EBB通过调控ROS1-RAGE轴抑制糖化炎症，为天然复合物的协同机制提供新见解。
应用价值：EBB可作为功能性成分用于抗衰老食品和化妆品，其明确的作用靶点（如ROS1）为开发新型抗糖化药物提供方向。
六、研究亮点
1. 多模型系统验证：涵盖细胞、斑马鱼和小鼠，数据层次丰富；
2. 创新方法：结合UHPLC-MS/MS成分分析与转录组学，揭示ROS1的新功能；
3. 转化潜力：EBB的剂量组合（如低剂量即有效）具备产业化可行性。
七、其他价值
研究还发现EBB可提升全身抗氧化能力（如SOD/MDA指标），提示其潜在的系统性抗衰老应用。