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研究团队与发表信息

本研究由Judith Cendrero（西班牙巴塞罗那Vall d’Hebron大学医院卒中单元）领衔，联合来自西班牙、葡萄牙、美国等多国机构的学者共同完成，包括Jiahui Li（Vall d’Hebron研究所）、Miguel Serodio（葡萄牙里斯本医院）等。研究成果发表于《Journal of NeuroInterventional Surgery》（J NeuroIntervent Surg）2025年第0卷，DOI:10.1136/jnis-2025-023809。

学术背景与研究目标

科学领域：急性缺血性卒中（Acute Ischemic Stroke, AIS）的血管内治疗（Endovascular Thrombectomy, EVT）与辅助药物溶栓策略。

研究背景：
- EVT虽是治疗大血管闭塞（Large Vessel Occlusion, LVO）的标准方法，但首次再通失败率高达40%-70%，且再通成功并不等同于功能预后良好。
- 既往研究表明，动脉内（Intra-Arterial, IA）溶栓药物（如重组组织纤溶酶原激活剂rtPA和替罗非班tirofiban）可能通过靶向溶解残余血栓改善预后，但两者单独或联用的效果缺乏标准化评估。

研究目标：
开发一种基于人类血栓的体外测试平台，比较rtPA、tirofiban及序贯联用的溶栓效果，为临床优化辅助治疗策略提供依据。

研究流程与方法

1. 血栓采集与处理
- 样本来源：70例接受EVT的AIS患者术中取出的血栓，最小尺寸≥4mm。
- 保存方法：血栓在RPMI培养基中4℃保存≤48小时，以保持其结构和成分稳定性。
- 自体血浆制备：每位患者采集9mL EDTA抗凝血，离心后分离血浆，用于后续实验以减少个体差异。

2. 体外循环模型构建
- 技术核心：3D打印模拟大脑中动脉M2段血流环境的闭合循环系统（Form 3 SLA打印机，透明V4树脂）。
- 参数设置：蠕动泵控制流速30mL/min，系统容量8mL，压力与血流条件校准一致。

3. 实验分组与处理
- 分组设计：
- 对照组：仅自体血浆+生理盐水（6:3比例）。
- rtPA组：血浆+生理盐水+rtPA（终浓度0.33mg/mL）。
- tirofiban组：血浆+生理盐水+tirofiban（终浓度16.7μg/mL）。
- 序贯组：先rtPA处理5分钟，再tirofiban处理5分钟（总暴露时间10分钟）。
- 实验流程：血栓片段称重后置入循环系统，灌注对应溶液5分钟，取出后重新称重，以重量减少百分比量化溶栓效果。

4. 数据分析
- 统计方法：ANOVA比较组间差异，ANCOVA调整年龄、性别、血栓位置等混杂因素。
- 临床变量关联分析：评估糖尿病、闭塞位置等对溶栓效果的影响。

主要研究结果

1. 溶栓效率：

   • rtPA和tirofiban单药均显著减少血栓重量（rtPA 20.7%，tirofiban 20.6%，p<0.001），但两者无显著差异（p=0.98）。
     
   • 序贯联用效果更优：血栓重量减少达37.9%（p<0.001），较单药额外提升17%。
     

2. 临床变量影响：

   • 血栓位于MCA-M1段者溶栓效果略差（p=0.051趋势），其他变量（如糖尿病、卒中病因）无显著关联。
     

3. 模型验证：

   • 自体血浆与人类血栓的组合成功模拟了生理性溶栓环境，为标准化药物测试提供了可靠平台。
     

结论与价值

1. 科学意义：

   • 首次在体外模型中证实rtPA与tirofiban序贯联用的协同溶栓效应，为临床联合用药提供了实验依据。
     
   • 建立的3D打印血流循环系统可推广用于其他溶栓药物的 preclinical 测试。
     

2. 临床价值：

   • 针对EVT后残余血栓或远端栓塞（如血小板富集型血栓），序贯疗法可能成为优化再通的策略。
     
   • 为个体化溶栓方案（如根据血栓位置或成分选择药物）奠定了基础。
     

研究亮点

1. 创新方法：

   • 结合人类血栓与自体血浆的体外模型，最大限度还原体内溶栓条件。
     
   • 3D打印技术定制血管几何结构，实现血流动力学的高度模拟。
     

2. 关键发现：

   • 序贯用药的溶栓效果并非简单叠加，提示rtPA可能通过纤维蛋白降解暴露血小板靶点，增强tirofiban的作用。
     

3. 局限性：

   • 未系统分析血栓组织学成分（如红细胞/血小板比例），未来需结合显微CT或病理学验证。
     
   • 序贯组暴露时间更长（10分钟），需进一步实验排除时间混杂因素。
     

其他有价值内容

• 伦理与数据共享：研究获Vall d’Hebron伦理委员会批准（PR(AG)234/2017），原始数据可通过通讯作者申请获取。
  
• 基金与利益冲突：无专项资助，作者声明无利益冲突。
  

此研究为卒中治疗领域提供了重要的方法论工具和理论支持，后续需通过临床试验验证序贯疗法的安全性与有效性。