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钙成像表征太赫兹辐射对斑马鱼幼虫的神经生物学效应

期刊:sensorsDOI:10.3390/s23187689

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作者及发表信息

本研究由Xin Song(天津大学医学工程与转化医学研究院)、Haibin Li(天津大学精密仪器与光电子工程学院)等共同完成,通讯作者为Meijun PangYuye Wang(均来自天津大学)。论文题为《Calcium imaging characterize the neurobiological effect of terahertz radiation in zebrafish larvae》,发表于期刊Sensors(2023年9月6日,卷23,页7689),开放获取(CC BY 4.0许可)。


学术背景

研究领域
该研究属于太赫兹(THz)生物效应与神经科学交叉领域,聚焦太赫兹辐射对斑马鱼幼虫神经活动的调控机制。

研究动机
太赫兹波(0.1–10 THz)因其低能量特性,可与生物分子通过振动、氢键等相互作用,但对其神经生物学效应的机制尚不明确。既往研究多关注体外细胞或哺乳动物模型,缺乏活体神经活动的实时可视化证据。斑马鱼幼虫因其透明大脑和遗传可操作性,成为研究神经活动的理想模型。

研究目标
1. 探究2.52 THz辐射对斑马鱼幼虫行为及神经元钙信号的影响;
2. 阐明多巴胺相关基因的表达变化;
3. 验证太赫兹辐射的神经生物效应是否独立于热效应。


研究流程与方法

1. 实验对象与分组

  • 研究对象:7日龄斑马鱼幼虫(7 dpf),分为三组:
    • 对照组:无辐射;
    • 遮蔽组:覆盖锡箔以屏蔽太赫兹波(仅受热效应影响);
    • 辐射组:接受2.52 THz、50 mW/cm²辐射(10分钟或20分钟)。
  • 样本量:行为实验每组8个样本(3次独立重复);钙成像每组5个样本。

2. 太赫兹辐射系统

  • 设备:采用FIRL 100太赫兹气体激光器(Edinburgh Instruments),输出功率稳定(波动2.03%),波长2.52 THz(功率50 mW/cm²)。
  • 温度控制:使用高灵敏度温度探头监测辐射前后温度变化(差异≤0.2°C),排除热效应主导的可能性。

3. 行为学实验

  • 方法:通过DanioVision系统记录斑马鱼在光暗交替刺激下的运动轨迹,分析:
    • 总游泳距离、速度、最大加速度;
    • 运动状态(高活跃、活跃、静止)的频率与累积时长。

4. 神经钙成像

  • 转基因斑马鱼:选用Tg(huc:GCaMP6s)品系,其全神经元表达钙离子荧光探针GCaMP6s。
  • 成像技术:激光共聚焦显微镜(Nikon A1R)获取三维脑部图像,定量分析荧光强度(反映神经元兴奋性)。

5. 分子生物学分析

  • qPCR:检测多巴胺相关基因表达:
    • 受体基因(*drd2b*、*drd4a*、*drd1b*);
    • 合成与转运基因(*th*、*slc6a3*)。

6. 数据分析

  • 统计方法:GraphPad Prism 8进行t检验,数据以均值±标准误表示,显著性阈值p<0.05。

主要结果

1. 行为学变化

  • 运动增强:20分钟辐射组的总游泳距离、速度及最大加速度显著增加(p<0.01),高活跃状态频率上升(图2)。
  • 热效应排除:遮蔽组(仅受热)无显著行为变化,表明效应由非热机制驱动。

2. 神经元活动增强

  • 钙信号升高:辐射组全脑神经元荧光强度显著增加,尤以端脑(telencephalon)区域为著(图3-4)。
  • 实时成像验证:首次在活体模型中可视化太赫兹辐射对神经活动的即时调控。

3. 多巴胺通路激活

  • 基因表达:*drd2b*、*drd4a*、*th*、*slc6a3*显著上调(p<0.05),而*drd1b*无变化(图5),提示多巴胺D2/D4受体通路特异性响应。

结论与价值

科学意义
1. 首次结合钙成像与行为学,证实2.52 THz辐射通过非热效应增强斑马鱼神经元兴奋性;
2. 揭示多巴胺合成与转运基因的上调是行为变化的分子基础;
3. 为太赫兹神经调控的临床应用(如神经疾病治疗)提供理论依据。

应用价值
- 太赫兹波或可作为神经刺激工具,用于帕金森病等多巴胺通路异常疾病的干预研究;
- 斑马鱼模型与钙成像技术为活体神经研究提供了高效方法。


研究亮点

  1. 技术创新
    • 整合太赫兹辐射与活体钙成像,实现神经活动的实时可视化;
    • 开发遮蔽组设计,明确区分热效应与非热效应。
  2. 发现新颖性
    • 揭示太赫兹波对多巴胺通路的特异性调控;
    • 提出2.52 THz可作为安全神经刺激参数的潜在选择。

其他价值

  • 研究局限性:未实时监测辐射中的钙信号动态,未来可结合光片显微镜(LSFM)优化时间分辨率。
  • 拓展方向:探索太赫兹对其他神经递质(如乙酰胆碱)通路的影响。

(报告总字数:约1800字)

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