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该研究由Hanxiao Sun、Bo Lu、Zeyu Zhang等作者共同完成，研究团队来自北京大学、中国科学院遗传与发育生物学研究所等机构。该研究于2025年发表在《Nature Methods》期刊上，题为“Mild and ultrafast GLORI enables absolute quantification of m6A methylome from low-input samples”。
该研究属于表观转录组学（epitranscriptomics）领域，主要关注RNA修饰的定量分析。m6A（N6-甲基腺苷）是真核生物mRNA中最常见的修饰之一，其在基因表达调控中具有重要作用。近年来，多种m6A检测方法被开发出来，但现有的方法在低RNA输入样本中的应用受到限制，尤其是GLORI（Glyoxal and Nitrite-mediated RNA Deamination）方法，虽然能够实现m6A的绝对定量，但其反应时间长且会导致RNA严重降解，限制了其在低输入样本中的适用性。因此，研究团队旨在开发一种更快速、温和且适用于低输入样本的GLORI方法，以实现m6A甲基组的绝对定量。
研究团队开发了两种改进的GLORI方法：GLORI 2.0和GLORI 3.0。以下是详细的研究流程：
GLORI 1.0的优化
研究团队首先分析了GLORI 1.0的化学反应机制，发现其RNA降解问题主要源于“鸟苷保护”（G-protection）步骤。通过进一步研究，团队提出了一种新的反应机制，认为GLORI 1.0中的快速腺苷脱氨反应是由一种关键中间体A*（双半缩醛结构）促进的。基于这一假设，团队优化了反应条件，去除了G-protection步骤，开发了一种快速、温和的一锅法脱氨反应，能够在50°C下10分钟内完成反应，同时保持RNA的完整性。
GLORI 2.0的开发与应用
GLORI 2.0基于优化后的化学反应，能够在约10,000个细胞的RNA输入下实现m6A的绝对定量。研究团队首先在HEK293T细胞中验证了GLORI 2.0的性能，通过高通量测序检测了m6A位点，并验证了其定量准确性。结果显示，GLORI 2.0在低RNA输入（2 ng）下仍能生成高质量的测序文库，并且与GLORI 1.0相比，能够检测到更多的m6A位点，尤其是在低丰度转录本中。
GLORI 3.0的开发与应用
为了进一步降低RNA输入量，研究团队开发了GLORI 3.0，该方法通过引入一种“逆转录沉默载体RNA”（RT-silent carrier RNA）来减少RNA损失，能够在500-1,000个细胞的RNA输入下实现m6A的绝对定量。研究团队在小鼠背侧海马体的细胞质和突触组分中应用了GLORI 3.0，成功揭示了突触相关基因集中的高m6A修饰水平。
GLORI 2.0的性能验证
在HEK293T细胞中，GLORI 2.0检测到了138,373个m6A位点，且在不同生物学重复中表现出高度一致性（r=0.95）。此外，GLORI 2.0在低RNA输入（2 ng）下仍能生成高质量的测序文库，并且与GLORI 1.0相比，能够检测到更多的m6A位点，尤其是在低丰度转录本中。
GLORI 3.0的性能验证
GLORI 3.0在100 ng、20 ng和10 ng总RNA输入下均能生成高质量的测序文库，并且在10 ng总RNA输入下（相当于约500个HEK293T细胞）仍能检测到大量m6A位点。研究团队在小鼠背侧海马体的细胞质和突触组分中应用了GLORI 3.0，发现突触相关基因集中的m6A修饰水平显著高于其他基因。
该研究开发的GLORI 2.0和GLORI 3.0方法显著提高了m6A绝对定量的灵敏度和适用性，尤其是在低RNA输入样本中的应用。这些方法不仅能够实现全转录组范围的m6A定量，还能够进行位点特异性的m6A检测，为表观转录组学研究提供了强大的工具。
研究团队还开发了一种“逆转录沉默载体RNA”，该载体RNA能够在逆转录过程中自动去除，从而减少RNA损失，提高低输入样本的测序质量。这一技术不仅适用于GLORI方法，还可以广泛应用于其他转录组或表观转录组测序研究中。