这篇文档属于类型a，即报告了一项独立原创研究的学术文献。以下是对该研究的详细学术报告：

一、研究团队与发表信息
本研究的通讯作者为Qin Zhao（南京医科大学康达学院第一附属医院康复医学科）与Qinglun Su（同单位），第一作者Xiaomei Xia（南京医科大学康达学院）与Wenli Chen（东南大学中大医院康复医学科）等合作完成。研究发表于*International Immunopharmacology*期刊2025年第149卷，文章编号114148。

二、学术背景与研究目标
科学领域：研究聚焦缺血性脑卒中（ischemic stroke）后的神经炎症调控机制，属于神经免疫代谢交叉领域。
研究动机：既往研究表明，小胶质细胞（microglia）在脑缺血后被激活并极化为促炎性M1表型，加剧神经元损伤。而代谢重编程（metabolic reprogramming）尤其是糖酵解（glycolysis）增强被视为M1极化的关键驱动因素。丙酮酸激酶M2型（PKM2）是糖酵解限速酶，其二聚体可入核调控炎症基因表达，但PKM2在脑缺血中的作用机制尚不明确。
研究目标：探讨PKM2激活剂TEPP-46能否通过抑制糖酵解促进小胶质细胞向抗炎性M2极化，从而缓解脑缺血损伤。

三、实验设计与流程
研究采用体内（小鼠模型）与体外（原代小胶质细胞）双模型系统，共分七个关键步骤：

1. PKM2表达验证

   • 对象：C57BL/6J雄性小鼠（n=3/组）建立短暂大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型，分1/3/7天三个时间点；原代小胶质细胞经氧糖剥夺/复氧（OGD/R）处理。
     
   • 方法：免疫荧光检测脑梗死周边区（penumbra）Iba1+小胶质细胞中PKM2共定位；Western blot定量PKM2表达。
     
   • 关键发现：小胶质细胞激活伴随PKM2表达随时间递增（p<0.001），OGD/R后6-12小时达峰值。
     

2. TEPP-46神经保护效应

   • 处理：tMCAO小鼠术后腹腔注射TEPP-46（50 mg/kg，3天）；体外OGD/R后加10 μM TEPP-12小时。
     
   • 检测：
     
     • 炎症指标：Western blot显示TEPP-46降低促炎因子（iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6）表达（p<0.01）。
       
     • 血脑屏障：上调紧密连接蛋白（claudin5、occludin、ZO-1）。
       
     • 脑损伤：TTC染色显示梗死体积减少（p<0.01），改良神经功能缺损评分（mNSS）改善（p<0.05）。
       

3. 小胶质细胞表型转化

   • 标志物分析：qPCR与免疫荧光显示TEPP-46抑制M1标记物IL-1β（p<0.001），促进M2标记物CD206表达（p<0.01）。
     
   • 吞噬功能：利用pHrodo荧光标记法，TEPP-46组吞噬效率升高2.3倍（p<0.001）。
     

4. 糖酵解抑制机制

   • 代谢检测：Seahorse分析显示TEPP-46降低细胞外酸化率（ECAR）（p<0.001）；ELISA证实乳酸生成减少（p<0.01）。
     
   • 葡萄糖摄取：2-NBDG荧光法显示TEPP-46抑制OGD/R诱导的葡萄糖摄取增强（p<0.05）。
     

5. PKM2核转位调控

   • 构象分析：交联实验证实TEPP-46促进PKM2四聚体形成（tetramer/monomer比值升高，p<0.01）。
     
   • 亚细胞定位：核质分离实验显示TEPP-46抑制PKM2入核（核内PKM2减少42%，p<0.01）。
     

6. HIF-1α通路干预

   • 互作验证：Co-IP实验表明TEPP-46阻断PKM2与HIF-1α结合。
     
   • 下游基因：qPCR显示糖酵解基因（GLUT1、LDHA）mRNA水平下降（p<0.05）。
     

7. 机制总结与可视化
   通过共聚焦 microscopy与模式图阐明TEPP-46通过稳定PKM2四聚体→抑制核转位→阻断HIF-1α信号→下调糖酵解→促进M2极化的级联机制。

四、主要结果与逻辑关联
1. PKM2上调关联炎症：脑缺血后小胶质细胞PKM2表达与炎症程度呈正相关，提示其作为调控靶点的潜力。
2. TEPP-46的多效性：通过抑制PKM2二聚化，同时实现抗炎（降低IL-1β）、促修复（提升CD206）及代谢重编程（抑制糖酵解），且体内外结果一致。
3. 代谢-免疫轴：首次证实PKM2-HIF-1α-糖酵解通路是小胶质细胞表型转换的枢纽，为“代谢干预免疫”提供直接证据。

五、研究价值与意义
科学价值：
- 揭示PKM2构象动态变化（四聚体/二聚体平衡）是调控小胶质细胞功能的新机制。
- 提出“代谢检查点”（metabolic checkpoint）概念，为神经炎症治疗提供新视角。
应用潜力：
- TEPP-46作为已进入临床实验的PKM2激活剂，具有快速转化潜力。
- 为脑卒中后神经保护策略开发提供特异性靶点。

六、研究亮点
1. 方法创新：首创PKM2二聚体/四聚体交联分析法结合亚细胞定位技术，精确解析TEPP-46作用位点。
2. 跨尺度验证：从分子互作（Co-IP）到动物行为学（mNSS评分）实现全链条证据整合。
3. 临床相关性：所有实验均模拟临床脑缺血再灌注损伤时间窗，结论具转化指导意义。

七、其他重要发现
研究发现TEPP-46可增强小胶质细胞对凋亡神经元的吞噬（CD68+细胞增多），提示其可能通过“清除损伤 debris”促进组织修复，这一功能独立于抗炎作用，值得进一步研究。