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用于动态重连基因组网络的自传播条形码转座子系统

期刊:Molecular Systems BiologyDOI:10.15252/msb.202211398

这篇文档属于类型a,即报告了一项单一的原创研究。以下是对该研究的学术报告:

作者及研究机构

该研究由Max A. English、Miguel A. Alcantar和James J. Collins共同完成。作者分别来自麻省理工学院(MIT)的生物工程系、医学工程与科学研究所、哈佛大学的Wyss生物启发工程研究所以及Broad研究所。研究于2023年3月27日在线发表在《Molecular Systems Biology》期刊上。

学术背景

该研究的主要科学领域是合成生物学和基因组工程。研究背景是细菌中的自然转座子(transposon)移动能够驱动适应性基因组重排。研究者基于这一能力,开发了一种可诱导、自我传播的转座子平台,用于细菌中的全基因组连续诱变和基因网络的动态重连。研究的目的是通过该平台优化工业和治疗应用的菌株,例如通过重连基因网络来改善菌株在多种原料上的生长,同时帮助回答关于现有基因网络动态过程的基本问题。

研究流程

研究流程主要包括以下几个步骤:

  1. 转座子平台构建:研究者首先构建了一个可诱导的、自我传播的转座子平台。该平台基于来自角蝇(Haematobia irritans)的高活性转座酶Himar1C9,并设计了一个模块化的组合装配流程,用于将合成或内源的基因调控元件(如诱导启动子)以及DNA条形码(barcode)功能化到转座子上。

  2. 转座子功能化验证:研究者通过实验验证了转座子功能化的有效性。他们比较了不同转座子变体在大肠杆菌(Escherichia coli)群体中的影响,观察了这些群体在多种碳源利用和抗生素抗性表型上的平行进化。

  3. 碳源利用表型筛选:研究者设计了一个快速筛选实验,测试了31种碳源,并观察到转座子功能化后菌株在特定碳源上的生长优势。例如,在L-丝氨酸(L-serine)作为唯一碳源时,某些转座子功能化菌株表现出显著的生长优势。

  4. 动态环境下的进化实验:研究者进一步在动态环境下进行了进化实验,观察了转座子在交替碳源选择下的进化轨迹。他们发现,转座子的多次插入可以导致多基因表型的出现,并通过条形码技术纵向追踪转座子的位置,识别了基因网络重连的因果关系。

  5. 数据分析:研究者使用了一种改进的转座子插入测序(Tn-seq)流程,对转座子的插入位置进行了全基因组范围的高分辨率读取。通过条形码技术,他们能够在宿主群体中纵向追踪单个转座子谱系,并重建了插入突变谱系。

主要结果

  1. 转座子平台的有效性:研究者成功构建了一个可诱导的、自我传播的转座子平台,并验证了其在大肠杆菌中的有效性。实验表明,该平台能够通过转座子的连续动员,在宿主基因组中产生适应性插入。

  2. 碳源利用表型:在碳源利用表型筛选中,研究者发现转座子功能化菌株在L-丝氨酸、甘氨酰-L-谷氨酸(glycyl-L-glutamic acid)和β-甲基-D-葡萄糖苷(β-methyl-D-glucoside)等碳源上表现出显著的生长优势。特别是,某些转座子功能化菌株在L-丝氨酸上的生长能力显著增强。

  3. 动态环境下的进化:在动态环境下的进化实验中,研究者观察到转座子在交替碳源选择下的多次插入,导致多基因表型的出现。通过条形码技术,他们能够追踪转座子的插入位置,并识别了基因网络重连的因果关系。

  4. 数据分析结果:通过改进的Tn-seq流程,研究者能够全基因组范围地读取转座子的插入位置,并通过条形码技术纵向追踪单个转座子谱系。实验数据表明,转座子的插入位置与宿主的适应性表型密切相关。

结论

该研究成功开发了一种可诱导的、自我传播的转座子平台,用于细菌中的全基因组连续诱变和基因网络的动态重连。该平台不仅能够优化工业和治疗应用的菌株,还能够帮助回答关于现有基因网络动态过程的基本问题。研究结果表明,转座子功能化能够显著影响宿主菌株的适应性表型,特别是在碳源利用和抗生素抗性方面。

研究亮点

  1. 新颖的转座子平台:该研究开发了一种可诱导的、自我传播的转座子平台,具有高度的模块化和可扩展性。
  2. 全基因组范围的高分辨率读取:通过改进的Tn-seq流程和条形码技术,研究者能够全基因组范围地读取转座子的插入位置,并纵向追踪单个转座子谱系。
  3. 动态环境下的进化实验:研究者在动态环境下进行了进化实验,观察了转座子在交替碳源选择下的进化轨迹,揭示了多基因表型的出现机制。

其他有价值的内容

该研究还展示了转座子功能化在菌株优化中的潜在应用价值。例如,通过转座子功能化,研究者能够显著提高菌株在特定碳源上的生长能力,这为工业生产和生物治疗提供了新的思路。此外,该研究还为理解基因网络的动态进化过程提供了新的实验平台。

该研究不仅在合成生物学和基因组工程领域具有重要的科学价值,还在工业生产和生物治疗中具有广泛的应用前景。

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