学术研究报告：幼犬同时感染犬瘟热病毒、传染性犬肝炎病毒、犬细小病毒性肠炎、犬传染性气管支气管炎及弓形虫病的病例分析

第一作者及机构
本研究由巴西隆德里纳州立大学（Universidade Estadual de Londrina）动物病毒学实验室的Selwyn Arlington Headley博士领衔，合作机构包括奥地利维也纳兽医大学病理与法医兽医研究所、巴西北巴拉那大学兽医学院兽医病理学实验室等。论文发表于《Journal of Veterinary Diagnostic Investigation》2013年第25卷第1期。

学术背景
本研究属于兽医病理学与分子诊断学交叉领域。犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus, CDV）、犬腺病毒A型1/2（Canine Adenovirus A types ¹⁄₂, CAdV-1/2）、犬细小病毒2型（Canine Parvovirus type 2, CPV-2）及弓形虫（Toxoplasma gondii）是犬类常见病原体，但多病原共感染的系统性研究较少。巴西等发展中地区因疫苗接种率低，此类共感染常导致高死亡率与经济损失（年损失约1.475–1.603亿美元）。本研究旨在通过病理学与分子技术，揭示一只43日龄混种幼犬同时感染5种病原的机制与临床意义。

研究流程
1. 病例背景与样本采集
- 研究对象：一只出现抽搐、失明后死亡的幼犬，其同窝14只幼犬均死亡，母犬为未接种疫苗的10月龄比特犬混种，血清弓形虫抗体效价达1:1024。
- 尸检样本：采集脑、肺、肝、肾等10种组织，分别用于组织病理学、分子检测及寄生虫学分析。

1. 组织病理学分析

   • 方法：10%福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色。
     
   • 关键发现：
     
     • 肺部：间质性肺炎伴支气管上皮细胞胞浆内嗜酸性包涵体（CDV特征）。
       
     • 肝脏：坏死性肝炎伴库普弗细胞核内两性包涵体（CAdV-1特征）。
       
     • 心肌：坏死性心肌炎伴弓形虫滋养体。
       
     • 肠道：绒毛萎缩、隐窝坏死（CPV-2典型病变）。
       

2. 分子诊断

   • RT-PCR与PCR：
     
     • CDV：从尿、肺、脑等样本扩增N基因290 bp片段，测序显示与巴西野生型CDV株（如Paraná州分离株）高度同源（95–99%）。
       
     • CAdV-1/2：从肝、肾扩增E基因（508 bp/1,030 bp），证实病毒存在。
       
     • CPV-2：从肠系膜淋巴结扩增VP2基因583 bp片段。
       
     • 弓形虫：18S rDNA PCR-RFLP鉴定为弓形虫III型。
       
   • 原位杂交（ISH）：检测肝、肺中CAdV-1/2核酸，结果阴性。
     

3. 血清学与寄生虫学

   • 母犬间接荧光抗体试验（IFAT）确认高滴度弓形虫抗体，提示急性感染。
     
   • 粪便浮聚法未检出胃肠道寄生虫。
     

主要结果
1. 多病原共感染的病理证据：
- CDV与CAdV-1包涵体分别存在于肺与肝，CPV-2导致肠道病变，弓形虫引发心肌炎、肝炎及肺炎。
- 分子检测证实所有病原共存于同一宿主，排除犬疱疹病毒1型（CaHV-1）参与。

1. 弓形虫感染途径：

   • 母犬孕期感染弓形虫，通过胎盘垂直传播至幼犬（先天性弓形虫病），其高抗体效价与幼犬多器官弓形虫病变支持这一假说。
     

2. 流行病学意义：

   • CDV的免疫抑制效应（破坏SLAM阳性细胞）与幼犬免疫未成熟共同促成多病原协同感染。
     
   • 巴西流行的CDV野生株可分为两个进化分支，本研究毒株属于主要分支，与当地地理分布一致。
     

结论与价值
1. 科学价值：
- 首次系统报道犬类同时感染5种病原的病例，揭示CDV免疫抑制在共感染中的关键作用。
- 证实弓形虫可经胎盘传播至犬类，拓展了对非人宿主先天性弓形虫病的认知。

1. 应用价值：
   
   • 为发展中国家犬群健康管理提供警示：需加强CDV疫苗接种与弓形虫筛查。
     
   • 提出尿样PCR检测CAdV-2的新思路，可能简化临床诊断流程。
     

研究亮点
1. 方法创新：结合组织病理学、多重PCR与基因分型，实现病原精准定位。
2. 发现特殊性：揭示弓形虫III型在犬类先天性感染中的致病性，此前罕见报道。
3. 临床启示：幼犬多病原共感染需综合分子诊断与病理分析，避免漏诊。

其他价值
研究强调营养不良（14只同窝幼犬竞争资源）与幼龄的协同风险，为犬舍管理提供实践指导。