这篇文档属于类型a，即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告：

一、研究团队与发表信息
本研究由Huang Su、Yifan Chen、Xuyang Zhao等共同完成，通讯作者为Liqin Zhang（北京大学医学部天然药物及仿生药物国家重点实验室）。论文《Systematic Evolution of Functional Oligonucleotides for Targeted Protein Degradation》于2025年5月8日发表于期刊《Chem》（卷11，页码102408），DOI号为10.1016/j.chempr.2024.102408。

二、学术背景与研究目标
研究领域为靶向蛋白质降解（Targeted Protein Degradation, TPD）技术，旨在解决传统TPD技术（如PROTACs）面临的挑战：靶向配体（warhead）筛选耗时且依赖已知配体，连接子（linker）优化复杂。适配体（aptamer）因其体外进化能力被视为潜在解决方案，但缺乏功能性进化平台。本研究提出了一种系统性进化策略，直接筛选能同时结合靶蛋白并招募E3泛素连接酶的“功能性适配体”，建立可定制化降解任意靶蛋白的平台。

三、研究流程与方法
研究分为三大实验模块，均以BRD4（溴结构域蛋白4）和IRAK4（白介素-1受体相关激酶4）为模型靶蛋白：

1. 适配体-E3配体嵌合体（aptamer chimera）的进化

   • 文库设计：构建20 nt随机序列的DNA文库，末端修饰E3配体（如pomalidomide或VH032），通过乳液PCR将文库单克隆展示于微球。
     
   • 功能筛选：将微球与荧光标记的靶蛋白、泛素-FITC及E3连接酶系统共孵育，通过流式细胞术（FACS）分选能诱导泛素化的微球（双荧光信号）。
     
   • 迭代优化：经过多轮筛选与测序，获得高活性嵌合体（如PA2和VIA2），其降解效率分别达87%和79.4%。
     
   • 创新方法：首次将E3配体直接嵌入随机文库，通过功能性筛选替代传统“先结合后优化”策略；开发了基于点击化学的配体定点修饰技术。
     

2. 双特异性RNA适配体（bispecific RNA aptamer）的进化

   • 文库构建：采用核酸序列依赖性扩增（NASBA）技术构建40 nt随机RNA文库，通过乳液NASBA实现微球展示。
     
   • 筛选与验证：获得双特异性RNA降解剂BRA1，可同时结合BRD4和VHL E3连接酶，降解效率达79.2%。
     
   • 技术突破：首次建立RNA适配体的功能性进化平台，解决了RNA微球展示的技术难题。
     

3. 机制验证与体内外评估

   • 降解机制：通过蛋白酶体抑制剂MG132和泛素化抑制剂MLN4924证实降解依赖泛素-蛋白酶体系统（UPS）。
     
   • 下游效应：降解BRD4导致其下游蛋白c-Myc下调，并抑制BET家族蛋白（BRD2/3）表达。
     
   • 动物模型：在HEP3B（肝癌）和A375（黑色素瘤）皮下移植瘤模型中，嵌合体PA2/VIA2和RNA降解剂BRA1均显著抑制肿瘤生长（p<0.0001），且无显著毒性。
     

四、主要研究结果
1. 功能性适配体的高效筛选：PA2（pomalidomide修饰）对BRD4的KD值为5.3 nM，降解率优于传统PROTACs；VIA2通过缩短E3配体与随机区的距离，进一步提升了降解动力学。
2. 双特异性RNA的突破：BRA1无需化学修饰即可实现高效降解，其KD值达0.9 nM，展现了RNA适配体的天然优势。
3. 广谱应用潜力：同一平台成功降解IRAK4，验证了方法的普适性。

五、研究意义与价值
1. 科学价值：提出了“功能性适配体”新范式，将TPD开发从经验性优化转为定向进化。
2. 应用价值：为“不可成药”靶点提供降解工具，适配体可通过现有siRNA/mRNA递送系统实现临床转化。
3. 技术拓展：平台可延伸至调控蛋白质翻译后修饰或其他功能，如磷酸化、乙酰化等。

六、研究亮点
1. 方法创新：首次实现适配体的功能性直接进化，突破了传统结合筛选的局限性。
2. 多模态设计：涵盖DNA嵌合体、修饰DNA和天然RNA，其中RNA降解剂展现了最佳性能。
3. 机制深度验证：从体外泛素化到动物模型，系统性证实了降解机制与治疗效果。

七、其他价值
研究开发的微球展示与乳液NASBA技术可推广至其他核酸药物筛选，如ASO或siRNA优化。此外，分子动力学模拟揭示了PA2-BRD4-CRBN三元复合物的构象动态，为理性设计提供了结构基础。

（注：全文约2000字，涵盖研究全貌，重点突出方法学创新与跨学科价值。）