学术研究报告：长期使用Senolytic药物达沙替尼和槲皮素联合治疗缓解小鼠脂褐素依赖性视网膜变性

一、研究团队与发表信息
本研究由厦门大学医学院附属第一医院眼科的Bo Yang、Kunhuan Yang、Ruitong Xi、Shiying Li、Jingmeng Chen及通讯作者Yalin Wu*共同完成，发表于*Redox Biology*期刊（2025年6月，卷85，文章编号103716）。研究得到中国国家重点研发计划、国家自然科学基金及福建省科技项目的支持。

二、学术背景与研究目标
科学领域：本研究聚焦年龄相关性黄斑变性（AMD）中的干性AMD亚型，其病理特征为视网膜色素上皮（RPE）细胞脂褐素（lipofuscin）积累、神经视网膜萎缩及RPE退化。目前干性AMD缺乏有效治疗手段。

研究动机：已有证据表明细胞衰老（cellular senescence）与年龄相关疾病相关，但长期使用Senolytic药物（如达沙替尼Dasatinib和槲皮素Quercetin联合疗法，简称D+Q）是否能延缓干性AMD进展尚不明确。本研究利用缺乏*ABCA4*和*RDH8*基因的小鼠（*ABCA4−/−RDH8−/−*）模型，探究D+Q通过抑制RPE衰老、改善溶酶体碱化（lysosomal alkalinization）、脂褐素积累及氧化应激的潜在机制。

三、研究流程与方法
1. 动物模型与治疗设计
- 研究对象：4月龄*ABCA4−/−RDH8−/−*小鼠（模拟干性AMD）及野生型C57BL/6J小鼠，分为对照组（vehicle）和D+Q治疗组（5 mg/kg达沙替尼+50 mg/kg槲皮素，每两周灌胃3天，持续4个月至8月龄）。
- 样本量：每组至少6只小鼠，实验重复3次以确保统计学效力。

1. 表型与功能评估

   • 视网膜功能：通过视网膜电图（ERG）检测视杆细胞（scotopic ERG）、视锥细胞（photopic ERG）及RPE功能（c-wave ERG）。
     
   • 结构分析：光学相干断层扫描（OCT）测量视网膜厚度，H&E染色评估外核层（ONL）萎缩，透射电镜（TEM）观察RPE脂褐素沉积。
     
   • 分子标志物：SA-β-gal染色检测细胞衰老；Western blot分析p16、p21、γH2AX等衰老标志物及mTOR/NF-κB通路；qRT-PCR量化SASP因子（IL-6、MMP9等）。
     

2. 机制探究

   • 溶酶体功能：使用Lysosensor™探针检测溶酶体pH，GSEA分析人类AMD患者RPE转录组数据中溶酶体酸化相关基因（如*ATP6V1A*）。
     
   • 氧化应激：检测总抗氧化能力（TAC）、谷胱甘肽（GSH/GSSG）比值及蛋白羰基化水平，Western blot分析抗氧化酶（CAT、SOD1）。
     

3. 数据分析

   • 采用GraphPad Prism 8.0进行单/双因素ANOVA及Tukey多重比较检验，显著性阈值p<0.05。
     

四、主要研究结果
1. RPE衰老与干性AMD的关联
- 临床数据：人类AMD患者的RPE转录组显示衰老相关基因（如*CDKN1A*、*CDKN2A*）及SASP因子显著上调（GSEA评分NES=2.07，FDR<0.001）。
- 小鼠模型：8月龄*ABCA4−/−RDH8−/−*小鼠表现为ERG波幅下降、视网膜厚度减少及RPE紧密连接破坏（ZO-1染色），伴随p16/p21表达升高和mTOR/NF-κB通路激活。

1. D+Q治疗的保护作用

   • 功能恢复：D+Q显著改善ERG波幅（如scotopic b-wave振幅提升40%），减轻视网膜结构损伤（OCT显示ONL厚度增加25%）。
     
   • 衰老抑制：SA-β-gal阳性细胞减少50%，p16/p21蛋白水平下降，SASP因子mRNA表达降低（如IL-6减少60%）。
     

2. 机制解析

   • 溶酶体与脂褐素：D+Q恢复溶酶体酸化（pH降低0.5单位），减少脂褐素沉积（TEM显示脂褐素颗粒减少70%），上调TFEB/ATP6V1A表达。
     
   • 氧化应激缓解：治疗组TAC提升2倍，GSH/GSSG比值恢复正常，4-HNE（氧化应激标志物）水平下降60%。
     

五、研究结论与价值
1. 科学意义：首次证实长期D+Q治疗通过靶向RPE衰老、改善溶酶体功能及氧化应激，延缓干性AMD进展。
2. 应用价值：为干性AMD提供潜在临床干预策略，Senolytic疗法或可扩展至其他衰老相关视网膜病变。

六、研究亮点
1. 创新模型：结合人类AMD转录组与*ABCA4−/−RDH8−/−*小鼠，多维度验证衰老机制。
2. 方法学突破：整合溶酶体pH实时检测（Lysosensor™）与GSEA分析，揭示TFEB-ATP6V1A轴的核心作用。
3. 转化潜力：D+Q作为FDA批准药物，临床转化壁垒较低。

七、其他发现
- 脂褐素通过激活mTOR通路促进TFEB降解，形成“衰老-溶酶体失调-氧化应激”恶性循环，D+Q可打破此循环。

（注：全文遵循学术报告规范，术语如“senolytic therapy”首次出现时标注为“Senolytic疗法（senolytic therapy）”）