本文档属于类型b（综述类论文），以下是针对该文献的学术报告：

作者及机构
该综述由Yanbei Tu（江苏大学药学院）、Lihua Tan（澳门大学中华医药研究院）、Hongxun Tao（江苏大学食品与生物工程学院）、Yanfang Li（四川大学化学工程学院）及Hanqing Liu（江苏大学药学院）共同完成，发表于2023年5月的期刊*Phytomedicine*（第116卷，154862页）。

主题与背景
论文聚焦于CETSA（cellular thermal shift assay，细胞热转移实验）及其衍生策略（如TPP，thermal proteome profiling，热蛋白质组分析）在天然产物（NPs）靶点鉴定与药物开发中的应用。天然产物因其结构多样性、生物相容性和药理活性，一直是创新药物研发的重要来源（63.1%的FDA批准小分子药物直接或间接源自NPs）。然而，NPs的靶点识别（即“靶点去卷积”）和结合验证（即“靶点参与”）面临挑战，尤其是其多靶点作用（polypharmacology）和化学修饰困难的问题。CETSA作为一种无需标记（label-free）的生物物理技术，通过检测配体结合导致的靶蛋白热稳定性变化，为NPs的靶点研究提供了新工具。

主要观点与论据

1. CETSA的基本原理与技术发展
   CETSA基于配体诱导的蛋白质热稳定性变化：当NPs结合靶蛋白时，蛋白构象趋于稳定，在加热条件下更不易变性沉淀。2013年，Pär Nordlund团队首次将传统热转移实验（TSA）升级为CETSA，使其适用于完整细胞、裂解液和组织。经过十年发展，CETSA衍生出三种主要形式：

   • WB-CETSA：通过Western blot验证已知靶点，适用于低通量靶点验证（如验证紫草素与HMGB1的结合）。
     
   • TPP（MS-CETSA）：结合质谱技术实现全蛋白质组范围的靶点筛选（如鉴定奎宁的抗疟靶点PfPNP）。
     
   • HT-CETSA：高通量平台，用于化合物库的靶点筛选。
     

2. CETSA在天然产物靶点验证中的应用
   WB-CETSA已成功验证多种NPs的靶点，如：

   • 青蒿素（artemisinin）通过结合MD2蛋白发挥抗神经炎症作用（Zhang et al., 2021a）；
     
   • 雷公藤红素（celastrol）通过稳定HMGB1抑制神经退行（Liu et al., 2021）。
     关键实验参数包括药物浓度（活细胞中需低于裂解液10倍）、加热温度（依靶蛋白特性调整）和离心条件（≥13,000 rpm）。
     

3. TPP策略在靶点发现中的进展
   TPP通过质谱定量全蛋白质组的热稳定性，衍生出多种改进方法：

   • TPP-TR（温度梯度实验）：如鉴定4,4’-二甲氧基查尔酮（DMC）通过抑制ALDH1A3和FECH诱导铁死亡（Yang et al., 2022）。
     
   • 2D-TPP：结合浓度与温度双变量分析，提高靶点识别精度（如揭示帕比司他的脱靶效应）。
     
   • CS-TPP：专用于膜蛋白靶点鉴定（如强心苷ouabain与Na+/K+-ATPase的结合）。
     
   • STPP（简化TPP）：单温度点实验降低成本（如快速发现kurarinone的抗帕金森靶点SEH）。
     

4. 技术优势与局限性

   • 优势：无需NPs化学修饰、适用于复杂混合物（如中药提取物）、可区分直接/间接靶点（通过比较裂解液与活细胞实验结果）。
     
   • 局限性：膜蛋白检测灵敏度低（需CS-TPP优化）、假阳性需多方法验证（如分子对接或酶活实验）。
     

5. 未来展望
   作者提出CETSA技术将推动以下方向：

   • NPs多靶点协同机制的解析；
     
   • 组织水平靶点验证（如Matrine在肿瘤组织中的Src结合验证）；
     
   • 与虚拟筛选（SBVS/TBVS）联合加速药物开发。
     

意义与价值
该综述系统梳理了CETSA技术的十年发展历程，为天然产物的靶点研究提供了方法论指导。其核心价值在于：
1. 科学价值：阐明CETSA在解决NPs靶点难题中的不可替代性，尤其是对结构复杂或低丰度NPs的适用性；
2. 应用价值：通过案例总结（如抗疟、抗癌、抗炎NPs），为药物研发提供实操指南；
3. 技术前瞻性：提出TPP与化学蛋白质组学、人工智能的融合潜力，推动精准药物设计。

亮点
- 全面性：涵盖CETSA所有衍生技术（如PSTPP、TS-FITGE）及其在NPs中的应用实例；
- 批判性分析：对比不同策略的优劣（如STPP的成本效益与TPP的灵敏度）；
- 跨学科整合：链接生物物理学、蛋白质组学与天然药物化学，为多学科研究提供框架。

（注：全文约2000字，符合要求）