学术研究报告：共生奈瑟菌中blaTEM基因的存在及其对致病性呼吸道细菌获得性耐药性的潜在影响

第一作者及机构
本研究由Anisha Sunil、Kennedy Kumar和Kopula S. Sridharan共同完成，作者单位均来自印度金奈的Sri Ramachandra高等教育与研究学院（Sri Ramachandra Institute of Higher Education and Research）的微生物学系和检验医学系。论文于2023年11月25日发表在开放获取期刊《Cureus》上，标题为《Presence of the blaTEM Gene in Commensal Neisseria spp.: A Possible Cause for the Acquired Drug Resistance Among Pathogenic Respiratory Bacteria》，DOI编号为10.7759/cureus.49389。

学术背景
本研究聚焦于微生物学与临床耐药性领域，重点关注共生奈瑟菌（Commensal Neisseria spp.）中blaTEM基因（编码质粒介导的β-内酰胺酶）的流行及其对致病菌耐药性传播的潜在影响。奈瑟菌属包括致病种（如淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌）和共生种（如浅黄奈瑟菌、干燥奈瑟菌等），后者通常定植于人类上呼吸道黏膜。近年来，共生奈瑟菌对青霉素的耐药性逐渐增加，研究者推测其可能通过水平基因转移（horizontal gene transfer, HGT）将耐药基因传播给致病菌。

研究背景指出，β-内酰胺类抗生素的滥用可能导致共生菌成为耐药基因的储存库。blaTEM基因能够水解β-内酰胺环，使细菌对青霉素等药物产生耐药性。若该基因通过质粒转移至致病性奈瑟菌或其他革兰阴性杆菌，可能加剧临床耐药问题。因此，本研究旨在通过表型和分子方法，明确呼吸道样本中分离的共生奈瑟菌携带blaTEM基因的情况及其耐药表型。

研究流程与方法
1. 样本采集与处理
- 样本来源：研究纳入274例呼吸道样本（238例痰液和36例咽拭子），来自Sri Ramachandra大学的临床微生物科。
- 初步筛选：样本通过革兰染色筛选革兰阴性双球菌，并接种于血琼脂（blood agar）和巧克力琼脂（chocolate agar），37°C培养过夜。

1. 菌种鉴定

   • 表型分析：基于菌落形态、氧化酶和过氧化氢酶试验鉴定奈瑟菌属。
     
   • 质谱确认：使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）进一步确认菌种，共鉴定出5类共生奈瑟菌：浅黄/微黄/深黄奈瑟菌复合体（N. flava/subflava/perflava）、浅黄奈瑟菌（N. flavescens）、黏液奈瑟菌（N. mucosa）、干燥奈瑟菌（N. sicca）和长奈瑟菌（N. elongata）。
     

2. 药敏试验

   • 方法：采用Kirby-Bauer纸片扩散法，依据CLSI 2021 M-100指南测试对7种抗生素的敏感性，包括青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、四环素等。
     
   • 结果解读：将结果分为敏感、中介和耐药三类。
     

3. 分子检测

   • 基因扩增：使用PCR检测blaTEM基因，引物为TEM-F/TEM-R（260 bp产物）。通过凝胶电泳确认扩增结果。
     

主要结果
1. 菌株分布
- 从274份样本中分离出65株共生奈瑟菌（23.7%），痰液和咽拭子的阳性率分别为22.6%和30.5%。
- 年龄分布显示，61-70岁人群携带率最高（23.1%），而极年轻或年老组较低（各3.1%）。

1. 耐药表型

   • 青霉素耐药：所有菌株均对青霉素耐药（93.9%为完全耐药，6.1%为中介）。
     
   • 其他抗生素：对阿奇霉素敏感性最高（92.3%），其次为头孢曲松和头孢噻肟（各86.1%）。
     

2. blaTEM基因流行率

   • PCR检测显示93.9%（61/65）的菌株携带blaTEM基因，但多数菌株仍对头孢类敏感，提示基因可能未充分表达。
     

结论与意义
1. 科学价值
- 证实共生奈瑟菌是blaTEM基因的重要储存库，可能通过质粒转移至致病菌（如淋病奈瑟菌），导致临床耐药性扩散。
- 发现blaTEM基因的高流行率（93.9%）与青霉素耐药性高度相关，但头孢类仍有效，为临床用药提供参考。

1. 应用价值
   
   • 呼吁加强社区监测，关注共生菌的耐药基因传播风险。
     
   • 建议优先选择咽拭子作为筛查样本，因其检出率高于痰液。
     

研究亮点
1. 高耐药基因检出率：首次在印度人群中报道共生奈瑟菌blaTEM基因的极高流行率（93.9%）。
2. 方法学严谨性：结合表型（MALDI-TOF）与分子（PCR）技术，提升菌种鉴定和基因检测的准确性。
3. 临床警示性：强调共生菌作为耐药基因“中转站”的潜在威胁，需重新评估抗生素使用策略。

局限性
1. 样本量较小（65株菌），需扩大研究以验证结果普适性。
2. 未分析blaTEM基因与致病菌的克隆关联性，未来需通过全基因组测序进一步探索。

本研究为理解耐药性传播机制提供了关键证据，并为公共卫生政策制定提供了科学依据。