学术研究报告：四逆散（Sinisan）通过促进结肠分泌细胞谱系定向和黏蛋白生成缓解急性结肠炎

一、研究团队与发表信息
本研究由北京中医药大学中药学院的蔡亚杰（Ya-Jie Cai）、兰建杭（Jian-Hang Lan）、李硕（Shuo Li）等主导，合作单位包括中国中医科学院望京医院肛肠科和北京中医药大学生命科学学院。通讯作者为北京中医药大学的刘润平（Run-Ping Liu）。研究成果发表于2025年的《Journal of Integrative Medicine》（第23卷，第429–444页），DOI号为10.1016/j.joim.2025.06.004。

二、学术背景与研究目标
溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis, UC）是一种以直肠和远端结肠慢性炎症为特征的全球性健康威胁，临床表现为体重下降、黏膜炎症、腹泻和腹痛等。当前治疗手段（如TNF拮抗剂、JAK抑制剂）的缓解率仅为30%–60%，且手术并发症风险高。肠道黏液屏障功能障碍与UC进展密切相关，而黏液层的主要成分黏蛋白（Mucin）由杯状细胞（Goblet Cell）分泌，其再生依赖于肠道干细胞（Intestinal Stem Cell, ISC）的增殖与分化。

四逆散（Sinisan, SNS）是源自汉代《伤寒论》的复方中药，由柴胡、白芍、枳实和甘草按等比例组成，既往研究表明其对UC、肠易激综合征等疾病具有疗效，但其通过调控ISC再生和分泌细胞分化修复黏膜屏障的机制尚不明确。本研究旨在揭示SNS通过促进ISC更新和分泌细胞谱系定向（Secretory Cell Lineage Commitment）缓解急性结肠炎的作用机制。

三、研究流程与方法
1. 动物模型构建与治疗
- 研究对象：6周龄雄性C57BL/6N小鼠，分为对照组、DSS（葡聚糖硫酸钠）诱导的结肠炎模型组、SNS低剂量（1.56 g/kg）和高剂量（3.12 g/kg）治疗组，每组5只。
- 处理流程：通过3% DSS饮水7天建立急性结肠炎模型，同时灌胃SNS；第8天恢复普通饮水，采集结肠组织。
- 评估指标：疾病活动指数（DAI）、结肠长度、脾系数、组织病理学评分（H&E染色）、炎症细胞浸润（CD11b免疫组化）、炎症因子（IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18）的mRNA水平（RT-qPCR）。

1. 网络药理学与血液成分分析

   • 方法：通过超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS/MS）鉴定SNS入血成分，结合Batman-TCM数据库预测靶点基因；通过GeneCard获取结肠炎相关基因，取交集分析SNS潜在作用通路。
     
   • 分析工具：Metascape进行通路富集、转录因子预测和蛋白质互作（PPI）分析。
     

2. RNA测序与机制验证

   • RNA-seq：对比DSS组与SNS治疗组的差异表达基因（DEGs），聚焦炎症、脂代谢、增殖和凋亡相关通路。
     
   • 体外实验：分离小鼠结肠隐窝，培养类器官（Organoid），模拟LPS（脂多糖）损伤后SNS的修复作用，检测ISC标志物（Lgr5、Sox9）、分泌细胞标志物（Atoh1、Muc2）的表达（免疫荧光、RT-qPCR）及黏蛋白分泌（AB-PAS染色）。
     

四、主要研究结果
1. SNS缓解急性结肠炎症状
- DSS组小鼠体重下降20%、结肠缩短（P < 0.001），SNS高剂量组显著改善（P < 0.001）。
- 组织学显示SNS减少黏膜损伤和炎症细胞浸润（CD11b+细胞减少），下调IL-6等促炎因子表达（P < 0.01）。

1. 调控ISC再生与分泌细胞分化

   • RNA-seq揭示SNS上调Wnt通路（Lgr5、Sox9）和分泌细胞关键转录因子Atoh1，抑制Notch通路（Dll1）。
     
   • 类器官实验中，SNS（2 mg/mL）增加类器官出芽数量（P < 0.05），促进Ki67+增殖细胞和Atoh1+Muc2+杯状细胞分化（Pearson系数提高50%）。
     

2. 网络药理学预测活性成分

   • 11种入血成分（如柴胡皂苷A、芍药苷）靶向炎症和脂代谢通路；7种成分（如甘草酸）调控分泌细胞分化。
     

五、结论与价值
本研究首次阐明SNS通过促进ISC更新和杯状细胞分化修复黏液屏障的机制，为UC治疗提供了新靶点。其科学价值在于：
1. 揭示中药复方通过多靶点调控ISC微环境的独特作用模式；
2. 提出“炎症-ISC功能障碍-黏液屏障损伤”的病理轴及干预策略。
临床应用潜力包括开发基于ISC再生的联合疗法或SNS活性成分的精准药物。

六、研究亮点
1. 方法创新：结合类器官模型与网络药理学，系统性解析复方中药机制；
2. 发现新颖：首次报道SNS通过Atoh1-Muc2轴促进黏液分泌；
3. 跨学科整合：融合传统中药学、干细胞生物学和代谢组学。

七、其他价值
研究还发现SNS可能通过富集Akkermansia muciniphila（一种益生菌）协同修复肠道屏障，为“菌群-宿主”互作研究提供了新思路。