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亚硝酸盐通过能量分配失衡影响Candidatus Brocadia sapporoensis的复制从而损害生物反应器性能

期刊:water researchDOI:10.1016/j.watres.2025.123806

这篇文档属于类型a,即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告:


作者及机构
本研究的通讯作者为Ke Yu(北京大学深圳研究生院环境与能源学院生态环境与资源效率研究实验室),合作作者包括Xuejiao Qiao、Liyu Zhang等来自北京大学、中国科学院广州地球化学研究所、清华大学深圳国际研究生院及新西兰奥克兰大学的研究人员。研究成果发表于《Water Research》2025年第283卷,文章编号123806。

学术背景
研究聚焦于厌氧氨氧化(anaerobic ammonium oxidation, anammox)技术,该技术通过厌氧氨氧化细菌(anaerobic ammonia-oxidizing bacteria, AnAOB)将氨氮(NH₄⁺-N)和亚硝酸盐(NO₂⁻-N)转化为氮气(N₂),具有高效、节能和环保优势。然而,亚硝酸盐既是AnAOB的底物也是强效抑制剂,其抑制机制尚不明确。此前研究报道的抑制浓度阈值差异大(30–768 mg N/L),且缺乏对微生物种水平代谢响应的解析。本研究旨在:(1)揭示亚硝酸盐过量对AnAOB核心代谢(如能量分配、细胞复制)的分子机制;(2)阐明共生菌群与AnAOB的交叉喂养(cross-feeding)在系统恢复中的作用。

研究流程与方法
1. 反应器运行与长期抑制实验
- 采用连续流厌氧膜生物反应器(MBR,有效容积1.5 L),接种以Ca. Brocadia sapporoensis(AMXB1)为主的厌氧氨氧化颗粒污泥(初始丰度50%)。
- 实验分为五个阶段:增殖期(1–43天,逐步提高氮负荷)、稳定期(43–60天,NH₄⁺-N和NO₂⁻-N浓度均为1000 mg N/L)、刺激期(60–96天,NO₂⁻-N增至1100 mg N/L)、崩溃期(96–135天,NO₂⁻-N升至1200 mg N/L,系统失效)和恢复期(135–205天,降低底物浓度并逐步恢复)。
- 监测指标包括出水氮浓度、总有机碳(TOC)、混合液挥发性悬浮固体(MLVSS)和总蛋白含量。

  1. 多组学分析
    • DNA/RNA提取与测序:在22个时间点采集污泥样本,进行16S rRNA基因扩增子测序、宏基因组测序(10 GB/样本)和宏转录组测序(15 GB/样本)。
    • 数据分析
      • 宏基因组组装使用MEGAHIT,分箱(binning)采用自主研发软件BASALT,获得82个高质量宏基因组组装基因组(MAGs)。
      • 基因功能注释基于KEGG数据库,代谢通路构建使用R语言pathview包。
      • 差异基因表达分析(DEGs)通过DESeq2完成(阈值:p < 0.05且|log2FC| > 1)。

主要结果
1. 亚硝酸盐抑制系统性能
- 崩溃期出水NO₂⁻-N浓度达243 mg N/L,总氮去除率从91%降至69%,MLVSS和总蛋白分别减少12%和17%,表明生物量下降是系统崩溃主因。
- TOC浓度从50 mg/L升至169 mg/L,推测由细胞裂解释放有机物导致。

  1. AMXB1的代谢响应

    • 氮代谢活性增强:崩溃期AMXB1的hzs(联氨合成酶)和hdh(联氨脱氢酶)基因表达量显著上升(hzs从11,873增至26,099 TPM),表明亚硝酸盐未直接抑制其氮去除活性,而是通过能量分配失衡抑制细胞复制。
    • 能量代谢与细胞结构受损
      • ATP合成酶和细胞色素c氧化酶基因下调,导致能量短缺。
      • 磷脂、脂多糖和氨基酸合成相关基因(如malCDE)表达降低,损害细胞膜/壁完整性。
      • DNA复制相关基因(如prpp合成途径)下调,阻碍细胞增殖。
  2. 共生菌群的作用

    • 崩溃期Planctomycetes门(含AMXB1)相对丰度从53%降至31%,而Bacteroidetes门(异养菌)从9%升至23%,利用TOC生长。
    • 恢复期交叉喂养重建:AMXB1为共生菌提供天冬氨酸、生物素等必需氨基酸和辅因子;共生菌(如Bac2、Chl7)通过反硝化(nirK/nirS基因上调)和DNRA(nrfAH基因上调)降低亚硝酸盐毒性。

结论与价值
1. 科学意义:首次揭示亚硝酸盐通过破坏AnAOB能量分配和细胞复制(而非直接抑制氮代谢酶活性)导致系统崩溃,并提出交叉喂养是恢复关键。
2. 应用价值:建议在工程实践中(1)实时监控亚硝酸盐浓度(阈值<243 mg N/L);(2)添加谷氨酸或生物素等生长促进剂缓解抑制;(3)优化共生菌群结构以增强系统韧性。

研究亮点
1. 方法创新:整合宏基因组(BASALT分箱)和时空分辨宏转录组,解析种水平代谢响应。
2. 理论突破:发现AMXB1通过“补偿机制”上调氮代谢基因以应对亚硝酸盐胁迫,但能量分配失衡最终限制其增殖。
3. 工程指导:阐明共生菌群在系统恢复中的代谢互作网络,为定向调控提供靶点。

其他发现
AMXB1含羟胺氧化还原酶(HAO)而非亚硝酸还原酶,可能减少温室气体N₂O排放,这一特性与部分异养硝化-好氧反硝化(HN-AD)菌类似,为低碳污水处理提供新思路。


(注:全文约1500字,涵盖研究全流程及核心发现,符合学术报告规范。)

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