这篇文档属于类型a，即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告：
作者及机构
本研究由Yi Wang（第一作者）等来自北京天坛医院（Beijing Tiantan Hospital）、清华大学、苏州大学等机构的研究团队完成，发表于*Journal of Translational Medicine*（2023年，卷21，页672）。通讯作者为Yonghui Zhang、Liwei Zhang和Tao Sun。
学术背景
研究领域：本研究聚焦于胶质母细胞瘤（Glioblastoma, GBM）的免疫治疗，属于肿瘤免疫学与神经肿瘤学的交叉领域。
研究动机：GBM是恶性程度最高的原发性脑肿瘤，标准治疗（手术、放疗、化疗）后患者中位生存期仅15-20个月，5年生存率不足5.4%。尽管免疫治疗在实体瘤中取得进展，但基于αβ T细胞的CAR-T疗法对GBM效果有限，亟需开发新策略。
背景知识：
1. γδ T细胞：Vγ9Vδ2 T细胞是外周血中主要的γδ T亚群，可通过T细胞受体（TCR）识别肿瘤细胞表面分子BTN2A1/BTN3A1或磷酸抗原（如IPP/DMAPP），无需MHC限制性。
2. B7-H3：一种在70%以上GBM中高表达的免疫检查点分子，是潜在的CAR-T靶点。
研究目标：探索Vγ9Vδ2 T细胞对GBM的治疗潜力，并通过基因工程改造（CAR-B7H3）增强其疗效。
研究流程
1. Vγ9Vδ2 T细胞的制备与体外功能验证
- 样本来源：从健康供者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增Vγ9Vδ2 T细胞，使用含唑来膦酸（Zol）和IL-2的无血清培养基，10天后纯度达90%（流式细胞术检测TCR Vδ2表达）。
- 体外杀伤实验：以不同效靶比（E:T）将Vγ9Vδ2 T细胞与GBM细胞系（U-87MG、TJ905、HTB15）共培养18-20小时，通过荧光素酶活性检测肿瘤细胞存活率，ELISA检测IFN-γ和TNF-α分泌。结果显示，Vγ9Vδ2 T细胞以剂量依赖性方式抑制GBM增殖（p<0.05），且U-87MG最敏感。
2. 患者来源肿瘤细胞簇（PTCs）模型验证
- 样本：26例不同级别胶质瘤患者的PTCs（6例II级、5例III级、15例GBM）。
- 分组：根据Vγ9Vδ2 T细胞对PTCs的杀伤效果分为强效组（SAT，6例）和弱效组（WAT，20例）。
- 机制分析：
- 免疫组化（IHC）：SAT组BTN2A1/BTN3A1蛋白表达显著高于WAT组（p<0.05）。
- RNA测序：SAT组富集脂质代谢（如PPAR信号通路）和炎症相关通路（如TGF-β）。
3. WAT组的增敏策略
- 方法：在WAT原代细胞（如TT-LS、TT-YZJ）中加入Zol（抑制FPPS）或BTN3A1激动抗体（20.1）。
- 结果：两种处理均显著提升Vγ9Vδ2 T细胞的杀伤效果（p<0.05），证实TCR-BTN通路的关键作用。
4. CAR-B7H3-γδT细胞的构建与验证
- 载体设计：第三代CAR结构（含B7-H3 scFv、CD28/4-1BB/CD3ζ共刺激域），通过慢病毒转导Vγ9Vδ2 T细胞，纯度达69.5%。
- 功能验证：
- 体外：CAR-B7H3-γδT细胞对B7-H3高表达的WAT原代细胞（阳性率>90%）杀伤效果优于未改造细胞（p<0.05），且分泌更多IFN-γ/TNF-α。
- 体内：在NSG小鼠GBM模型中，脑室内注射CAR-B7H3-γδT细胞比Vγ9Vδ2 T细胞更显著抑制肿瘤生长（p<0.0001），延长生存期（44天 vs. 38天）。
5. 安全性评估
- 动物实验：高剂量（5×10^6细胞）注射未引起肝、肺等器官病理损伤或细胞因子风暴（多重荧光检测证实）。
- 细胞浸润：多色免疫荧光显示，CAR-B7H3-γδT细胞在肿瘤中浸润峰值出现在注射后第7天。
主要结果
1. Vγ9Vδ2 T细胞的异质性疗效：26例PTCs中，23.1%对Vγ9Vδ2 T细胞敏感（SAT），其BTN2A1/BTN3A1表达显著高于WAT组（IHC评分>10）。
2. 增敏机制：Zol或BTN3A1抗体可通过激活TCR-BTN通路增强WAT组的杀伤效果。
3. CAR改造的优势：CAR-B7H3-γδT细胞兼具B7-H3靶向性和天然γδ T细胞功能，对B7-H3高表达GBM效果更优（体外杀伤率提升50%，小鼠生存期延长16%）。
结论与价值
1. 科学意义：首次系统评估Vγ9Vδ2 T细胞在GBM中的疗效异质性，揭示BTN2A1/BTN3A1作为疗效预测标志物的潜力，并阐明脂质代谢通路与免疫响应的关联。
2. 应用价值：CAR-B7H3-γδT细胞为GBM提供了一种新型“双靶向”疗法（同时靶向B7-H3和磷酸抗原），且脑室内注射安全性良好，具有临床转化前景。
研究亮点
1. 创新模型：采用PTCs模拟患者肿瘤微环境，优于传统细胞系模型。
2. 双轨增敏策略：结合小分子药物（Zol）和基因工程（CAR），克服了单一疗法的局限性。
3. 跨学科方法：整合免疫组化、RNA-seq、多色荧光等技术，全面解析疗效差异的分子机制。
其他价值
研究提出的“BTN2A1/BTN3A1筛查- CAR改造-脑室给药”策略，为其他实体瘤的γδ T细胞疗法提供了范式。