本研究由徐州医科大学附属医院神经内科的Xiaoyu Huang、Zhouao Zhang等多位学者共同完成，通讯作者为Guiyun Cui、Ming Shi、Junnian Zheng和Yong Zhang。该研究于2026年1月2日发表在《Science Advances》期刊上，题为“BCMA/CD19 CAR T cell therapy for refractory myasthenia gravis: proteomic signatures and single-cell transcriptomics of disease flares”。
重症肌无力（Myasthenia Gravis, MG）是一种由B细胞介导的经典自身免疫性疾病，其核心病理机制是外周免疫耐受机制的破坏，导致自身反应性B淋巴细胞成熟为抗体分泌效应细胞，产生高滴度的致病性自身抗体。这些抗体主要靶向神经肌肉接头处的突触后成分，包括乙酰胆碱受体（AChR）、肌肉特异性激酶（MuSK）等，进而损害突触传递功能。
目前，约有10%至20%的MG患者对一线免疫抑制治疗反应欠佳，经历反复的肌无力危象，被归类为难治性MG。尽管已有针对性的生物制剂疗法（如利妥昔单抗、伊奈比利珠单抗等）显示出一定疗效，但部分患者仍对这些生物治疗产生耐药，这类“超难治性”MG病例迫切需要新的治疗策略。嵌合抗原受体T细胞（CAR T细胞）疗法在治疗血液系统肿瘤方面取得了显著成功，近年来其治疗领域正扩展到自身免疫性疾病的管理。已有初步研究表明，靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的RNA工程化CAR T细胞和抗CD19 CAR T细胞在MG患者中展现了安全性和初步疗效，但这些单靶点疗法存在需要重复给药、未能实现完全临床缓解、仍依赖免疫抑制治疗等局限性。基于B细胞在MG发病中的关键作用，以及单靶点CAR T细胞无法全面清除致病性B细胞亚群的不足，研究者设计了BCMA/CD19双靶点CAR T细胞疗法，以期全面重置B细胞的致病功能。
本研究是一项针对难治性MG患者的临床研究，共纳入6例难治性MG患者（2例男性，4例女性，年龄32至64岁），入组时间为2023年7月至2024年5月。所有患者均为全身型MG，在CAR T细胞治疗前MGFA分级为II级或III级，既往接受过多种免疫抑制剂和免疫调节剂治疗，符合难治性MG标准。患者基线时QMG评分为8至20分，ADL评分为6至12分。其中3例合并胸腺瘤，1例有胸腺增生，2例胸腺正常；4例曾接受胸腺切除术。
研究流程包括以下关键步骤：首先，从患者自体外周血T淋巴细胞出发，通过慢病毒载体转导制备BCMA/CD19双特异性CAR T细胞产品，该产品为第二代CAR结构，包含双特异性串联单链可变区片段、CD8α铰链区和跨膜区、4-1BB共刺激域和CD3ξ激活域。转导效率经体外验证为53%至73%。患者在CAR T细胞输注前接受氟达拉滨（30 mg/m²/day）和环磷酰胺（300 mg/m²/day）连续3天的淋巴细胞清除化疗，随后以1×10⁶ CAR细胞/kg体重的剂量输注。
研究采用多维度的监测和评估体系：安全性监测方面，使用CTCAE v5.0标准评估不良事件，CRS和ICANS采用ASTCT共识标准进行分级；疗效评估方面，通过MG-ADL和QMG评分从基线至12个月的纵向变化进行评估；CAR T细胞扩增动力学方面，在输注后60天内通过实时PCR检测CAR转基因拷贝数；血清学分析方面，监测抗AChR抗体滴度、免疫球蛋白水平及可溶性BCMA水平。
研究还纳入了多项转化研究程序：采用Olink蛋白质组学技术检测92种炎症蛋白和92种免疫反应蛋白的血清表达水平；通过流式细胞术进行免疫监测，分析B细胞亚群、B细胞功能（包括共刺激分子表达、细胞因子产生）、T细胞功能和表型；检测AChR-α特异性B细胞的比例；在体外通过CD40L+IgM+IL-21刺激体系评估重建B细胞向抗体分泌细胞分化的能力和IgG产生能力。
尤为重要的是，研究者对1例复发患者（P6）在治疗前和治疗后180天的外周血单个核细胞（PBMCs）和骨髓样本进行了单细胞RNA测序（scRNA-seq）和V(D)J测序，通过10x Genomics平台和高通量测序，结合Seurat、Monocle、CellChat等生物信息学工具进行数据分析。此外，研究还设置了验证队列，包括40例健康对照和46例初治MG患者进行流式验证，以及14例接受利妥昔单抗治疗的MG患者（8例缓解，6例复发）进行对比分析。
临床疗效方面：BCMA/CD19 CAR T细胞输注后，患者P1至P5在治疗后6个月时达到轻微临床表现状态（MMS），并停用所有药物，QMG评分降至0或2分，ADL评分均为0。在12个月延长随访中，这5例患者持续维持无药物和无症状缓解状态（QMG 0，ADL 0）。血清学分析显示，P1、P2、P5的AChR抗体滴度转阴，P3和P4降至临界水平。所有患者在输注后14天均出现完全的B细胞清除（0% B淋巴细胞），B细胞重建（BCRC）平均发生在156±83天，P2至360天仍未出现BCRC。P6在输注后180天内表现出临床改善（QMG从16降至5，ADL从12降至3），AChR抗体在90天时降至0.01 nM，但180天时略有回升至0.33 nM，随后在187天出现疾病复发，12个月随访时ADL评分虽有波动但仍显著低于基线。
安全性方面：6例患者对CAR T细胞疗法耐受良好，无ICANS发生。仅2例患者（P1和P5）出现1级CRS，表现为轻度发热，经标准支持治疗后好转。P5在输注后7天出现短暂的3级白细胞减少和血小板减少。P3和P6分别出现延迟性白细胞减少，P6在90天时还合并4级中性粒细胞减少，经重组人粒细胞集落刺激因子治疗后迅速恢复。P1和P3发生2级细菌性肺炎。未报告肝肾功能损害等严重不良事件。血清炎症因子监测未发现持续性异常升高。
Olink蛋白质组学分析：炎症panel显示，多种细胞因子（CXCL9、CXCL10、TNFRSF9、IL-8、IL-10、IFN-γ）在输注后14天内呈进行性升高，30天后开始下降，而IFN-γ持续保持上调趋势。免疫反应panel显示，抗炎介质和负性调节因子（LILRB4、LAG3、NFATC3、CD83、CD28）显著上调，促炎分子TREM1显著下调，提示向免疫稳态的转变。
B细胞功能重建：4例重建患者（P1、P3、P4、P5）的B细胞以幼稚B细胞（CD19+CD27−IgD+）为主，B细胞活化/抗原呈递标记（OX40L、CD70、CD80、CD86、CD83）下调，促炎因子（IL-6、GM-CSF）下调，免疫调节因子IL-10上调。AChR-α特异性B细胞群明显减少，且重建后的B细胞在T细胞依赖刺激下向抗体分泌细胞分化能力受损，IgG产生减少。与此相反，复发的P6在180天时表现出年龄相关B细胞（ABCs，CD21−CD11c+T-bet+）和浆细胞（CD38+CD138+）的显著扩增，B细胞活化和促炎因子表达升高。
单细胞测序分析：对复发患者P6的scRNA-seq分析显示，ABCs在外周血中扩增，浆细胞在骨髓中扩增。差异基因分析鉴定出B细胞中203个上调基因和109个下调基因，上调基因富集于BCR信号、B细胞活化/增殖/分化、抗原呈递和细胞因子产生通路。B细胞与其他细胞类型的相互作用增强，MIF-CD74/CXCR4和MIF-CD74/CD44配体-受体信号通路上调。BCR库分析显示，治疗后出现明显的超扩增克隆，但以非类别转换的IgM重链为主。T细胞方面，CD4/CD8比例倒置，CD8+ T细胞的细胞毒活性（IFN-γ、CD107a、穿孔素、颗粒酶B）在B细胞清除期显著上调，B细胞重建期部分回落。scRNA-seq证实P6中细胞毒性CD8+ T细胞（表达GZMH、GZMK、GNLY）和活化CD8+ T细胞（表达HLA-DR）扩增，TCR克隆扩增也明显增加。
FCRL5的鉴定：伪时间轨迹分析揭示，在ABCs向浆细胞转变的分化路径上，Fc受体样蛋白5（FCRL5）表达依次上调。CAR T细胞应答者（P1/P4/P5）在输注后ABCs、转换记忆B细胞、浆母细胞和浆细胞中FCRL5表达下调，而非应答者（P6）保持高水平。利妥昔单抗治疗后复发的MG患者同样表现出ABCs扩增和FCRL5表达上调，且FCRL5在ABCs中表达强度最高。在验证队列中，初治MG患者外周血ABCs比例显著高于健康对照，且与QMG评分呈正相关。
本研究首次报告了BCMA/CD19双靶点CAR T细胞疗法在难治性MG患者中的1年随访数据。研究证实，该疗法在难治性MG中具有可行性、良好耐受性和显著疗效——5例患者实现无药物缓解，AChR抗体转阴或接近转阴，且安全性良好，无严重不良事件发生。研究将CAR T细胞疗法在自身免疫病中的“免疫重置”概念从理论框架转化为临床观察，通过动态监测血清蛋白和免疫细胞变化加以验证。更重要的是，本研究首次利用单细胞测序揭示了MG患者CAR T细胞治疗后复发的免疫景观特征，鉴定出ABCs扩增和FCRL5上调作为复发标志，并将FCRL5鉴定为既往未被识别的潜在治疗靶点。这一发现具有重要的转化医学价值，因为针对FCRL5的CAR T细胞疗法已在多发性骨髓瘤中成功实施。
本研究的科学价值在于：深入阐明了BCMA/CD19双靶点CAR T细胞在MG中的免疫调节机制，包括B细胞功能重塑和T细胞免疫重置；首次描绘了治疗后复发的单细胞转录组图谱；提出了FCRL5作为复发治疗靶点的新概念。应用价值在于：为超难治性MG患者提供了潜在的一劳永逸的治疗方案；为预测和管理治疗后复发提供了生物标志物；为开发针对FCRL5的靶向治疗奠定了理论基础。
本研究的亮点主要体现在以下几个方面：第一，首次采用BCMA/CD19双靶点设计，克服了单靶点CAR T细胞无法同时清除广谱B细胞系和浆细胞的局限，实现了更全面的B细胞清除和持续的临床缓解。第二，1年的随访周期显著超越以往MG CAR T细胞研究（6个月和62天），为疗效的持久性提供了更可靠的证据。第三，首次结合Olink蛋白质组学和单细胞转录组学技术，系统解析了CAR T细胞治疗后的免疫重建动态和复发机制。第四，鉴定出FCRL5作为MG复发的新靶点，并在独立验证队列（包括利妥昔单抗复发患者）中得到验证，展示了从临床观察到机制发现再到靶点验证的完整转化研究链条。第五，研究强调了ABCs在MG发病和复发中的重要作用，扩展了对MG免疫病理机制的认识。