这篇文档属于类型a，即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告：

研究团队与发表信息

本研究由Andi Peng、Jiahui Peng（共同第一作者）及合作者（Ruosha Lai、Wei Liu等）完成，通讯作者为Lihua Li。研究团队来自中国多所医疗机构：南昌大学江西医学院第二附属医院（Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery）、中南大学湘雅二医院（Department of Otolaryngology）及深圳大学第一附属医院（Department of Otolaryngology）。研究发表于期刊Combinatorial Chemistry & High Throughput Screening，2025年第28卷第15期，DOI: 10.2174/0113862073354456241219065512。

学术背景

研究领域：本研究聚焦于顺铂（cisplatin）耳毒性的分子机制及白藜芦醇（resveratrol）的保护作用，属于听觉病理学与药物保护机制交叉领域。

研究动机：顺铂是临床广泛使用的抗癌药物，但其耳毒性（ototoxicity）可导致不可逆的听力损伤，严重影响患者生活质量。既往研究表明，顺铂通过诱导耳蜗毛细胞（cochlear hair cells）的焦亡（pyroptosis）、线粒体活性氧（mtROS）积累等途径引发损伤。白藜芦醇作为一种天然多酚，具有抗氧化和抗炎特性，但其通过mtROS/TXNIP/NLRP3通路抑制焦亡的具体机制尚不明确。

研究目标：
1. 验证顺铂是否通过激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路诱导耳蜗毛细胞焦亡；
2. 探究硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）在该通路中的调控作用；
3. 阐明白藜芦醇通过抑制mtROS/TXNIP/NLRP3通路减轻耳毒性的机制。

研究方法与流程

研究采用小鼠耳蜗毛细胞系HEI-OC1构建顺铂耳毒性模型，分为六组：对照组、顺铂组、顺铂+si-NC（阴性对照）、顺铂+si-TXNIP（TXNIP敲低）、顺铂+mitoQ（线粒体ROS清除剂）、顺铂+白藜芦醇组。

关键实验流程

1. 细胞培养与处理：

   • HEI-OC1细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养，顺铂（30 μM）处理24小时诱导损伤。
     
   • 通过siRNA转染敲低TXNIP，或用mitoQ（100 nM）、白藜芦醇（50 nM）干预。
     

2. 细胞焦亡与炎症检测：

   • TUNEL染色和Ki67免疫荧光评估细胞凋亡与增殖；
     
   • 流式细胞术（FAM-YVAD-FMK染色）定量焦亡细胞比例；
     
   • ELISA检测炎症因子（IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α）水平。
     

3. 分子机制分析：

   • Western blot和qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、TXNIP等蛋白及mRNA表达；
     
   • 免疫共沉淀（Co-IP）验证TXNIP与硫氧还蛋白（TRX）、NLRP3的相互作用；
     
   • 线粒体功能检测：
     
     • DCFH-DA染色和流式术检测ROS；
       
     • TMRE染色测线粒体膜电位（MMP）；
       
     • Calcein-AM试剂盒评估线粒体通透性转换孔（mPTP）开放状态。
       

4. 数据统计：

   • 使用GraphPad Prism 9.0进行单因素方差分析（ANOVA）或t检验，数据以均值±标准差表示，*p < 0.05为显著性阈值。
     

主要结果

1. 顺铂激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路：

   • 顺铂显著上调NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD-N表达，增加焦亡细胞比例（流式结果：顺铂组 vs 对照组，*p < 0.05）；
     
   • 炎症因子（IL-1β、IL-6等）水平显著升高（ELISA数据支持）。
     

2. TXNIP的关键作用：

   • 顺铂上调TXNIP表达，促进TXNIP与NLRP3结合（Co-IP验证），同时减弱TXNIP与TRX的相互作用；
     
   • siRNA敲低TXNIP后，焦亡相关蛋白表达下降，炎症因子水平降低（WB与ELISA数据）。
     

3. mtROS的调控机制：

   • 顺铂导致mtROS积累、MMP降低及mPTP开放（TMRE与Calcein-AM实验结果）；
     
   • mitoQ（线粒体ROS清除剂）可逆转上述效应，并抑制TXNIP/NLRP3通路激活。
     

4. 白藜芦醇的保护效应：

   • 白藜芦醇作用类似mitoQ和TXNIP敲低，显著减少ROS生成、恢复MMP，并抑制焦亡通路（WB显示NLRP3、caspase-1表达下调）。
     

结论与价值

1. 科学意义：

   • 首次阐明顺铂通过mtROS/TXNIP/NLRP3通路诱导耳蜗毛细胞焦亡的分子机制；
     
   • 证实白藜芦醇通过靶向该通路发挥耳保护作用，为临床联合用药提供理论依据。
     

2. 应用价值：

   • 为顺铂耳毒性的干预提供新靶点（如TXNIP抑制剂或ROS清除剂）；
     
   • 支持白藜芦醇作为辅助治疗的潜力，可能改善癌症患者的生活质量。
     

研究亮点

1. 创新性发现：

   • 揭示TXNIP在顺铂耳毒性中的桥梁作用，连接mtROS与NLRP3炎症小体激活；
     
   • 明确白藜芦醇通过多靶点（ROS、TXNIP、NLRP3）协同发挥保护效应。
     

2. 方法学贡献：

   • 综合运用Co-IP、多重免疫荧光等高通量技术，系统解析蛋白互作网络；
     
   • 结合线粒体功能检测（MMP、mPTP）与焦亡标志物分析，提供多维证据链。
     

3. 局限性：

   • 研究仅基于HEI-OC1细胞系，未来需在动物模型中验证；
     
   • 未探讨其他细胞死亡途径（如铁死亡）的潜在交叉作用。
     

其他有价值内容

• 研究获得中国国家自然科学基金（8226040135）和江西省中医药科技计划（SZYB20224690）支持；
  
• 作者声明无利益冲突，数据公开透明。
  

（报告完）