这篇文档属于类型a，是一篇关于γ-芒果苷（gamma-mangostin, GMG）抑制结肠癌发生和干细胞特性的原创研究论文。以下为详细学术报告：
作者及发表信息
本研究由Alexander TH Wu（台北医学大学转化医学博士项目）、Yuan-Chieh Yeh（长庚纪念医院传统医学科）、Yan-Jiun Huang（台北医学大学附属医院结直肠外科）等共同完成，通讯作者为Tse-Hung Huang（长庚科技大学化学工程系）。论文发表于期刊Phytomedicine（2022年，第95卷，文章编号153797），在线发布于2021年10月21日。
学术背景
研究领域：肿瘤微环境（TME）与结肠癌耐药性机制。
研究动机：尽管化疗和靶向药物取得进展，结肠癌（CRC）仍因耐药性难以治愈。癌症相关成纤维细胞（CAFs）被证实通过促进癌症干细胞（CSCs）生成和耐药性驱动肿瘤进展。糖原合成酶激酶3β（GSK3β）信号通路与CSCs生成相关，但天然化合物对其的调控机制尚不明确。
研究目标：从Garcinia mangostana（山竹果壳）中分离的γ-芒果苷（GMG）能否通过抑制GSK3β/β-catenin/CDK6通路和上调miR-26b-5p克服CAFs诱导的耐药性。
研究流程与方法
1. 生物信息学分析
- 数据来源：TCGA/GTEx数据库分析GSK3β/CDK6/β-catenin mRNA在结肠癌中的表达；Mirandola数据库预测miR-26b-5p的表达与生存率关联。
- 工具：使用miRDB、TargetScan等算法预测miR-26b-5p的靶基因（GSK3β和CDK6）。
2. 分子对接模拟
- 方法：通过AutoDock软件模拟GMG与GSK3β（PDB:1Q5K）、β-catenin（PDB:1JDH）、CDK6（PDB:1XO2）的结合。
- 结果：GMG与GSK3β的结合能（-8.6 kcal/mol）优于FDA批准的抑制剂AZD1080（-8.4 kcal/mol），氢键相互作用距离更短（如Lys85:1.72 Å）。
3. 体外实验
- 细胞模型：人结肠癌细胞HCT116和HT29与CAFs共培养，模拟肿瘤微环境。
- 关键实验：
- 肿瘤球形成实验：CAFs共培养后，HCT116肿瘤球形成能力增强（直径>50 μm），GMG处理后显著抑制。
- 迁移实验：Transwell实验显示GMG减少CAFs诱导的细胞迁移（p<0.05）。
- 耐药性测试：CAFs使HT29对5-氟尿嘧啶（5-FU）的IC50从39.0 μM升至73.6 μM，GMG可逆转此效应。
- 流式细胞术：ALDH+（CSCs标志物）细胞比例在GMG处理后下降。
4. 体内验证
- 模型：NOD/SCID小鼠皮下接种CAFs预处理的HCT116肿瘤球。
- 处理组：对照组、GMG（10 mg/kg）、5-FU（10 mg/kg）、联合治疗。
- 结果：联合组肿瘤生长抑制最显著（p<0.001），Western blot显示GSK3β/β-catenin/CDK6表达下调，miR-26b-5p上调。
主要结果
- GSK3β通路激活与预后差相关：TCGA数据显示GSK3β/CDK6/β-catenin在结肠癌中高表达，且与低miR-26b-5p水平负相关（图1）。
- CAFs促进CSCs特性：共培养后，结肠癌细胞迁移、耐药性和ALDH+细胞比例均增加（图2）。
- GMG的调控作用：
- 抑制GSK3β/β-catenin/CDK6通路，下调NF-κB（图3f）。
- 通过上调miR-26b-5p（靶向GSK3β和CDK6的3’UTR）增强抗肿瘤效果（图5）。
- 体内协同效应：GMG与5-FU联合显著抑制肿瘤生长（图6a），且不引起体重下降（图6c）。
结论与价值
科学意义：首次揭示GMG通过双重调控（抑制GSK3β通路和上调miR-26b-5p）靶向结肠癌干细胞和微环境，克服耐药性。
应用价值：GMG作为天然化合物，具有开发为新型CRC联合治疗药物的潜力。
研究亮点
- 多组学整合：结合生物信息学、分子对接和实验验证，系统阐明GMG的作用机制。
- 创新靶点：发现miR-26b-5p与GSK3β/CDK6的调控关系，为CRC治疗提供新策略。
- 转化潜力：体内实验证实GMG与现有化疗药物的协同效应，具有临床转化前景。
其他价值
- 方法学贡献：开发了CAFs-CRC共培养模型，模拟肿瘤微环境对耐药性的影响。
- 计算工具应用：通过分子对接预测GMG的结合位点，为天然产物靶点鉴定提供范例。
（报告全文约1800字，涵盖研究全流程与核心发现）