该文档属于类型a，即报告了一项原创研究。以下是针对该研究的学术报告：
该研究由Jun Fan、Xueyu Yuan、Wenxin Li、Yan Zhou、Jue Zhang、Yi Zhang、Longshun Shi和Bin Zhou共同完成，研究机构包括江苏省核医学研究所、南京医科大学药学院和上海第十人民医院核医学科。研究于2020年8月4日发表在《Food and Agricultural Immunology》期刊上，题为“Rapid and ultrasensitive method for determination of aflatoxin M1 in milk”。
黄曲霉毒素（aflatoxins, AFTs）是一类由二氢呋喃香豆素衍生的毒素，根据紫外光照射下产生的荧光可分为B组、G组及其相关衍生物。AFTs能够抑制细胞蛋白质的合成，对人类和动物的健康构成严重威胁。其中，黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性最强，其毒性是氰化钾的10倍。AFB1在肝脏微粒体单加氧酶的作用下代谢为黄曲霉毒素M1（AFM1），AFM1具有329.27 Da的分子量，且具有较好的耐热性，常见的乳制品加工方法（如巴氏杀菌、高温短时杀菌和超高温灭菌）无法破坏其结构。因此，建立一种快速、准确检测牛奶中AFM1的方法具有重要意义。
该研究旨在开发一种基于荧光微球和Eu3+螯合物的快速、超灵敏检测方法（AFM1-POCT），以替代目前需要大型仪器和特定检测场所的传统方法。AFM1-POCT方法能够在5分钟内完成检测，且其准确性与超高效液相色谱（UHPLC）相当，同时提高了检测的便捷性和应用范围。
研究主要包括以下几个步骤：
试剂与仪器准备
研究使用了AFM1-BSA抗原和抗AFM1抗体（通过AFM1-KLH免疫获得），并购买了山羊抗兔抗体、荧光微球、NC膜、吸水纸、样品垫和结合垫等材料。羧基荧光微球通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDC）进行活化，随后与抗AFM1抗体或山羊抗兔抗体结合，形成标记物。
试纸条制备
将兔IgG和AFM1-BSA抗原分别稀释至0.2 mg/mL和0.8 mg/mL，涂布在硝酸纤维素膜上，37°C干燥8小时后，固定在PVC底板上，制成0.4 cm宽的试纸条，并储存在4°C环境中。
标记物制备
羧基荧光微球经过MES缓冲液洗涤后，加入NHS和EDC进行活化，随后与抗AFM1抗体或山羊抗兔抗体反应，最终制成标记物溶液。
检测流程
将标记物溶液与样品混合后，加入试纸条中，37°C反应5分钟后进行检测。通过荧光读数仪（激发波长365 nm，接收波长615 nm）记录荧光信号。
标准曲线与精密度分析
通过稀释AFM1抗原制备标准曲线，并使用logit-log回归拟合数据。精密度分析通过重复测量不同批次的样品进行。
放置稳定性与交叉反应性测试
测试了AFM1-POCT试纸条在4°C和37°C条件下的稳定性，并评估了AFB1和AFG1与AFM1的交叉反应性。
与UHPLC方法对比
从市场上随机选取100批次牛奶样品，分别使用AFM1-POCT和UHPLC方法检测AFM1含量，并进行对比分析。
标准曲线与精密度
标准曲线的线性方程为y = -2.4723x + 3.9696，回归系数r = 0.996。AFM1-POCT的批内和批间变异系数（CVs）分别为4%和5%，表明其具有较高的精密度。
放置稳定性
AFM1-POCT试纸条在4°C条件下储存12个月后，0.1 μg/kg和1 μg/kg样品的CVs分别为5.105%和12.371%，表明其具有较好的稳定性。
交叉反应性与检测限
AFB1和AFG1与AFM1的交叉反应率均低于0.1%，表明AFM1-POCT方法具有较高的特异性。AFM1-POCT的最低检测限为0.0121 μg/kg。
与UHPLC方法对比
AFM1-POCT与UHPLC方法的线性相关方程为y = 1.1118x - 8.6671，回归系数r = 0.9275，配对检验p = 0.515 > 0.05，表明两种方法的检测结果无显著差异。
该研究开发的AFM1-POCT方法具有快速、超灵敏、便携等优点，能够在5分钟内完成牛奶中AFM1的检测，且其准确性与UHPLC方法相当。该方法满足大多数国家和组织对AFM1检测限（0.05–0.5 μg/kg）的要求，适用于现场采样和快速检测。
创新性方法
AFM1-POCT方法基于时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）和纳米荧光微球技术，显著缩短了检测时间，同时保证了检测的准确性。
便携性与实用性
与传统的UHPLC方法相比，AFM1-POCT方法无需大型仪器，检测设备便携，适用于现场快速检测。
高灵敏度与特异性
AFM1-POCT方法的最低检测限为0.0121 μg/kg，且与AFB1和AFG1无交叉反应，具有较高的灵敏度和特异性。
该研究为牛奶中AFM1的快速检测提供了一种高效、可靠的解决方案，具有重要的科学价值和实际应用价值。AFM1-POCT方法不仅能够满足食品安全监管的需求，还可广泛应用于乳制品生产和质量控制领域，为保障公众健康提供了有力支持。