这项研究由Fanta Barrow、Saad Khan等来自University of Minnesota Medical School、University of Toronto等机构的研究团队完成，发表于2021年8月的《Hepatology》期刊（Volume 74, Issue 2）。研究聚焦非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic Steatohepatitis, NASH）的发病机制，重点探讨了肝脏内B细胞在NASH进展中的关键作用及其与肠道菌群的关联。
学术背景
NASH已成为全球肝衰竭和肝移植的主要诱因，其核心病理特征包括肝脏炎症、纤维化和代谢紊乱。尽管已知先天性和适应性免疫系统参与其中，但B细胞在NASH中的作用机制尚不明确。既往研究表明，肥胖相关代谢疾病中B细胞可通过分泌促炎因子（如TNF-α、IL-6）或抗原呈递功能加剧炎症，但其在肝脏局部微环境中的具体行为及其驱动因素仍需深入探索。本研究旨在揭示肠道菌群如何通过激活肝内B细胞，进而通过先天（如TLR-MyD88通路）和适应性（如BCR信号）免疫机制促进NASH进展。
研究流程与实验设计
动物模型构建
- 使用C57BL/6J野生型（WT）、B细胞缺陷型（μMT）及B细胞特异性MyD88敲除（B-MyD）小鼠，饲喂高脂高糖饮食（HFHC）诱导NASH模型，对照组为普通饮食（NCD）。实验周期为15-20周，样本量每组8-16只。
- 通过葡萄糖耐量试验（GTT）、胰岛素耐量试验（ITT）和丙酮酸耐量试验（PTT）评估代谢表型；采用组织染色（H&E、Masson三色）和NAFLD活动度评分（NAS）量化肝脏病理变化。
免疫细胞分析
- 单细胞RNA测序（scRNA-seq）：分离肝内免疫细胞，通过10x Genomics平台测序，Seurat软件聚类分析，鉴定B细胞亚群及其转录特征。结果显示NASH肝脏中B细胞富集促炎基因（如IL-1β、S100A8）。
- 质谱流式（CyTOF）：量化免疫细胞亚群比例，发现HFHC组B细胞占比达20-30%，且表面MHC-II和CD86表达升高，提示抗原呈递能力增强。
功能验证实验
- B细胞过继转移：将NASH小鼠肝内B细胞移植至μMT受体，显著加重胰岛素抵抗和肝纤维化，证实其致病性。
- Nur77-GFP报告系统：检测B细胞受体（BCR）激活强度，发现NASH肝内B细胞的Nur77表达显著升高，表明BCR信号参与其活化。
微生物组干预
- 粪菌移植（FMT）：将NAFLD患者肠道菌群移植至抗生素预处理的小鼠，结果显示受体小鼠肝内B细胞数量及活化标志物（CD86、MHC-II）增加，并伴随纤维化加重，提示菌群驱动B细胞激活的跨物种效应。
主要结果
- B细胞的促炎表型：HFHC饮食诱导的NASH模型中，肝内B细胞分泌TNF-α和IL-6的能力增强，且通过scRNA-seq发现其高表达炎症相关基因（如CXCL2、H2-aa）。
- B细胞缺陷的保护作用：μMT小鼠的肝纤维化、炎症评分及Th1细胞浸润显著降低，但脂肪变性无改善，表明B细胞主要驱动炎症而非代谢紊乱。
- MyD88依赖性机制：B-MyD小鼠的肝内B细胞抗原呈递功能减弱，CD4+ T细胞IFN-γ分泌减少，纤维化程度减轻，证实TLR-MyD88通路是B细胞活化的关键途径。
- 菌群-B细胞轴：FMT实验显示，NAFLD患者菌群可特异性激活受体小鼠肝内B细胞，且其促纤维化效应与人类疾病特征一致。
结论与意义
本研究首次系统阐明了肝内B细胞通过整合先天（MyD88）和适应性（BCR）免疫信号，在NASH进展中发挥核心作用。其科学价值在于：
1. 机制创新：揭示了肠道菌群-肝内B细胞-炎症/纤维化的级联反应，为NASH的免疫治疗提供新靶点（如靶向B细胞或MyD88）。
2. 转化意义：FMT实验证明菌群干预可调控B细胞功能，提示微生态调节剂或抗体疗法（如抗CD20）的潜在应用价值。
研究亮点
- 多组学整合：结合scRNA-seq、CyTOF和体内功能实验，全面解析B细胞的异质性与功能。
- 跨物种验证：通过人类菌群移植模型，强化了临床相关性。
- 双信号通路：同时揭示MyD88和BCR在B细胞活化中的协同作用，突破传统免疫调控认知。
其他价值
研究还发现肝内存在未成熟的B细胞亚群（高表达BAFF-R），可能参与NASH早期免疫应答，为后续探索B细胞分化与疾病分期关系奠定基础。此外，Nur77报告系统的应用为抗原特异性B细胞研究提供了新工具。