学术研究报告：Faecalibacterium prausnitzii通过增强抗肿瘤免疫提升NK/T细胞淋巴瘤中抗PD-L1疗效

作者及发表信息
本研究由Zhuangzhuang Shi（石壮壮）、Wenxing Jiang（蒋文星）、Hongwen Li（李洪文）等来自郑州大学第一附属医院肿瘤科、河南省淋巴瘤诊疗中心的研究团队完成，通讯作者为Mingzhi Zhang（张明智）和Zhaoming Li（李昭明）。论文于2025年发表在*BMC Medicine*（影响因子：9.3），标题为《Faecalibacterium prausnitzii promotes anti-PD-L1 efficacy in natural killer/t-cell lymphoma by enhancing antitumor immunity》，开放获取许可为CC BY-NC-ND 4.0。

学术背景
科学领域与背景知识
NK/T细胞淋巴瘤（Natural Killer/T-cell Lymphoma, NKTCL）是一种高度侵袭性的EB病毒（Epstein-Barr Virus, EBV）相关恶性肿瘤，亚洲和南美洲高发，预后极差。尽管免疫检查点阻断（Immune Checkpoint Blockade, ICB）疗法（如抗PD-L1单抗）在多种癌症中有效，但其对NKTCL患者的疗效仍有限。近年研究发现，肠道菌群（gut microbiota）可通过调节宿主免疫影响癌症治疗效果，其中Faecalibacterium prausnitzii（普拉梭菌）作为下一代益生菌，具有免疫调节功能，但其在ICB疗法中的作用尚未明确。

研究目的
本研究旨在探究F. prausnitzii是否可通过其代谢产物丁酸盐（butyrate）增强抗PD-L1疗法对NKTCL的疗效，并阐明其机制。

研究流程与方法
1. 动物模型构建与处理
- 研究对象：4-5周龄雌性C57BL/6小鼠，随机分为6组（每组n=6），包括对照组（PBS）、抗PD-L1单抗组、F. prausnitzii灌胃组（肿瘤接种前/后）及联合治疗组。
- 肿瘤模型：皮下注射EL4或RMA细胞（1×10^6个/鼠）构建NKTCL模型，通过活体成像监测肿瘤生长。
- 干预措施：
- F. prausnitzii灌胃：每日200 μL（2×10^8 CFU），持续至肿瘤直径达20 mm。
- 抗PD-L1单抗：腹腔注射10 mg/kg，每3天一次。
- 丁酸盐补充：饮用水中添加16 mM丁酸钠。
- 抗生素预处理：使用氨苄青霉素等抗生素混合物处理4天以破坏肠道菌群。

2. 微生物与代谢组学分析
- 菌群定量：通过液滴数字PCR（droplet digital PCR, ddPCR）和荧光原位杂交（FISH）检测粪便中F. prausnitzii的丰度。
- 丁酸盐检测：采用液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱（GC-MS）定量粪便、血浆及肿瘤组织中的丁酸盐浓度。

3. 免疫与分子机制研究
- 流式细胞术：分析肿瘤微环境（TME）中CD8+ T细胞、PD-L1表达水平。
- Western blot：检测JAK-STAT通路蛋白（如p-JAK3、p-STAT3）及PD-L1表达。
- 多重免疫组化（mIHC）：共定位CD4、CD8和PD-L1阳性细胞。
- ELISA：测定肿瘤组织匀浆中IFN-γ和Foxp3浓度。

4. 肠道菌群测序
- 16S rRNA测序：分析抗生素处理及F. prausnitzii干预后小鼠粪便菌群的α/β多样性及组成变化。

主要结果
1. F. prausnitzii增强抗PD-L1疗效
- 联合治疗组肿瘤体积和重量显著低于单药组（p<0.01），且Ki67表达降低（提示增殖抑制）。
- ddPCR和FISH证实F. prausnitzii在肠道定植（图1g）。

2. 丁酸盐介导协同效应
- 代谢组学显示联合组丁酸盐水平升高（粪便、血浆、肿瘤组织，p<0.001）。
- 丁酸盐补充组肿瘤生长抑制效果与F. prausnitzii灌胃组相当（图2d-f），且PD-L1表达下调（图3g）。

3. 免疫机制解析
- JAK-STAT通路抑制：Western blot显示丁酸盐降低p-JAK3/p-STAT3水平（图3a）。
- T细胞活化：联合组CD8+ T细胞比例增加（图4b），IFN-γ水平升高（图4d），mIHC证实PD-L1+细胞减少（图4e）。

4. 抗生素干扰与菌群修复
- 抗生素预处理削弱抗PD-L1疗效，但F. prausnitzii可恢复菌群多样性（图6a-d），并逆转Escherichia（致病菌）和Lactobacillus（有益菌）的失衡（图6e-k）。

结论与价值
科学意义
- 首次证实F. prausnitzii通过丁酸盐抑制JAK-STAT通路，降低PD-L1表达，增强CD8+ T细胞抗肿瘤活性，从而提升ICB疗效。
- 提出“益生菌-丁酸盐-免疫调节”轴作为NKTCL治疗新策略。

应用价值
- 为临床联合益生菌与ICB提供理论依据，尤其适用于抗生素导致的菌群失调患者。

研究亮点
1. 创新机制：揭示丁酸盐通过表观遗传调控（HDAC抑制）靶向JAK-STAT通路。
2. 方法学：结合ddPCR、mIHC等多组学技术，系统性验证菌群-免疫互作。
3. 临床转化潜力：F. prausnitzii或可作为生物标志物预测ICB响应。

局限性
- 需临床试验验证人体疗效；未排除其他代谢物（如丙酸盐）的潜在作用。

（全文约2000字）