这篇文档属于类型a，是一篇关于STING蛋白在肿瘤代谢调控中作用的原创研究论文。以下为详细学术报告：

一、研究团队与发表信息

本研究由Liting Zhang、Congqing Jiang等来自武汉大学口腔生物医学国家重点实验室、武汉大学医学研究院等机构的团队完成，通讯作者为Junjie Zhang。论文于2023年6月在线发表于Nature Cell Biology（DOI: 10.1038/s41556-023-01185-x），标题为《STING is a cell-intrinsic metabolic checkpoint restricting aerobic glycolysis by targeting HK2》。

二、学术背景

科学领域：肿瘤免疫与代谢调控。
研究动机：STING（Stimulator of Interferon Genes，干扰素基因刺激因子）是先天免疫信号适配蛋白，在抗肿瘤免疫中通过激活I型干扰素（IFN）通路发挥作用。然而，STING在多种人类恶性肿瘤中表观遗传沉默，其独立于免疫功能的细胞内在抑癌机制尚不明确。
关键背景：
1. 肿瘤细胞依赖有氧糖酵解（aerobic glycolysis，即“瓦氏效应”）支持增殖，并形成免疫抑制微环境。
2. STING的经典功能是通过cGAS-cGAMP-STING-TBK1-IRF3通路激活IFN反应，但其是否直接调控代谢未被探索。
研究目标：揭示STING如何通过靶向HK2（己糖激酶II）抑制糖酵解，从而促进抗肿瘤免疫。

三、研究流程与方法

1. STING抑制糖酵解的发现

• 实验对象：L929细胞（小鼠成纤维细胞）、THP-1细胞（人单核细胞）、MC38/CT26小鼠结直肠癌细胞模型。
  
• 关键实验：
  
  • 乳酸测定：STING敲除（KO）细胞分泌乳酸显著增加（图1b），且DNA刺激或HSV-1感染（诱导STING降解）进一步升高乳酸水平（图1c-d）。
    
  • 糖酵解能力检测：通过Seahorse分析仪发现STING KO细胞的细胞外酸化率（ECAR）升高（图1j）。
    
  • 代谢组学：STING缺失导致糖酵解中间产物（如果糖-6-磷酸、丙酮酸）积累（图3b）。
    

2. STING功能独立于先天免疫的验证

• 突变体构建：使用STING(S366A)（无法招募IRF3）和STING(R238A)（无法结合cGAMP）突变体。
  
• 结果：两种突变体均能抑制乳酸产生（图2b,e），证明STING的代谢调控不依赖免疫信号。
  

3. STING靶向HK2的机制

• 互作鉴定：质谱分析发现STING与HK2结合（图3d），Co-IP和GST pull-down验证直接互作（图3e-f）。
  
• HK2活性调控：
  
  • STING KO细胞线粒体HK2结合增加，HK活性升高（图3h）。
    
  • STING通过N端跨膜域（1-160aa）与HK2结合，其P2位点突变（P2A）破坏互作（图4e-g）。
    

4. 体内功能验证

• 小鼠模型：
  
  • MC38模型：STING过表达降低肿瘤生长和乳酸水平，增加CD8+ T细胞浸润（图5b-e）。
    
  • CT26模型：STING KO促进肿瘤生长和糖酵解（图5k-m）。
    
  • 免疫缺陷模型（NSG小鼠）：STING的抑瘤作用依赖免疫系统（图5f-h）。
    

5. 临床相关性分析

• 人类结直肠癌样本：STING表达与乳酸水平负相关，且高STING样本中CD8+ T细胞浸润更多（图8a-b）。
  

四、主要结果与逻辑链条

1. STING抑制糖酵解：通过靶向HK2阻断其线粒体定位和活性（图3-4）。
   
2. 独立于免疫的功能：STING(S366A/R238A)突变体保留代谢调控能力（图2）。
   
3. 体内抗肿瘤效应：STING-HK2轴通过减少乳酸分泌改善免疫微环境（图5-6）。
   
4. 临床意义：STING低表达与肿瘤高糖酵解和免疫抑制相关（图8）。
   

五、研究结论与价值

科学价值：
1. 首次揭示STING作为细胞内在的代谢检查点，直接调控HK2活性。
2. 提出“STING-HK2-糖酵解-免疫微环境”轴的全新机制，为肿瘤免疫治疗提供新靶点。
应用价值：
1. STING激动剂或HK2抑制剂可能联合免疫检查点抑制剂（如PD-1抗体）增强疗效。
2. STING表达水平可作为结直肠癌免疫治疗响应的潜在标志物。

六、研究亮点

1. 创新性发现：STING的非经典功能（代谢调控）与其经典免疫功能解耦。
   
2. 方法学创新：结合超分辨率显微镜（STED）和同位素标记代谢流分析（[U-13C]葡萄糖示踪）。
   
3. 转化意义：从分子机制到临床样本验证，形成完整证据链。
   

七、其他有价值内容

• 罕见SNV的发现：STING(P2S)自然突变体丧失HK2结合能力（图8c-g），提示人群遗传变异可能影响肿瘤易感性。
  
• 技术细节：使用Tet-on系统实现STING的诱导表达（图6），精确控制基因功能的时间窗口。
  

（总字数：约1,800字）