该文档属于类型a（单篇原创研究报告），以下是针对该研究的学术报告：
神秘果叶中三萜类化合物的抗肝癌活性研究
作者及机构
本研究由Qing Tang（暨南大学医学院药理学系）、Xiao-Yong Dai（清华大学深圳国际研究生院）等组成的跨机构团队完成，通讯作者为Lai-Qiang Huang（清华大学）、Guo-Cai Wang（暨南大学）和Yu-Bo Zhang（暨南大学）。研究成果发表于期刊《Industrial Crops & Products》第193卷（2023年），文章编号116155。
学术背景
研究领域：天然药物化学与肿瘤药理学。
研究动机：肝癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是全球第三大癌症死因，现有治疗手段存在局限性。神秘果（Synsepalum dulcificum）的叶片在传统医学中用于治疗糖尿病和高血压，但其抗肿瘤潜力尚未充分探索。此前研究发现其含有多酚、黄酮等活性成分，但三萜类化合物的抗肝癌机制尚未明确。
研究目标：从神秘果叶中分离新型三萜类化合物，评估其抗肝癌活性，并阐明其分子机制。
研究流程与方法
1. 化合物分离与结构鉴定
- 样本来源：2018年8月采集于中国广东台山市的30 kg神秘果叶片，经乙醇提取后获得粗提物2.8 kg，进一步通过石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分级萃取。
- 分离技术：采用高效液相色谱（HPLC）和核磁共振（NMR）技术，从乙酸乙酯部分分离出30种化合物，包括5种新化合物（1–4, 6）和25种已知化合物（5, 7–30）。
- 结构解析：通过高分辨质谱（HR-ESI-MS）、二维核磁（2D-NMR）和电子圆二色谱（ECD）计算，确定了新化合物的立体构型。例如，1和2为罕见的对映体香豆素木脂素，含三环结构；3–6为首次发现带有对香豆酰基（p-coumaroyl）的五环三萜类化合物。
2. 抗肝癌活性筛选
- 细胞模型：选用HepG2和HCCLM3两种肝癌细胞系，通过MTT法检测化合物3–25的细胞毒性。
- 关键发现：化合物4（SMG-1）抑制活性最强（IC50：HepG2为13.9 μM，HCCLM3为11.8 μM），后续机制研究聚焦于此化合物。
3. 分子机制研究
- ROS与线粒体凋亡：SMG-1通过激活JNK/p53通路，升高活性氧（ROS）水平，降低线粒体膜电位（ΔΨm），促进促凋亡蛋白Bax和细胞色素C（Cyt-c）的释放，激活caspase-9/caspase-3级联反应。
- 线粒体自噬（Mitophagy）：通过mRFP-GFP-LC3质粒转染和溶酶体共定位实验，证实SMG-1诱导线粒体自噬，表现为LC3-II转化增加和p62降解。
4. 实验创新方法
- ECD计算：首次应用于香豆素木脂素对映体的绝对构型确定。
- 自噬流检测：结合溶酶体抑制剂Baf-A1，验证SMG-1通过增强自噬流促进癌细胞死亡。
主要结果
- 新化合物发现：分离出2对香豆素木脂素对映体（1a/1b, 2a/2b）和3种新三萜（3–6），其中3–4为首次报道的带对香豆酰基的齐墩果烷型三萜。
- 抗肝癌活性：SMG-1显著抑制肝癌细胞增殖（EdU实验显示DNA合成减少，克隆形成能力下降）。
- 机制验证：
- ROS水平上升导致脂质过氧化（MDA升高）和抗氧化酶（SOD、GSH、GPx）活性降低。
- Western blot显示p-JNK、p53、BNIP3表达上调，Bcl-2下调。
- 线粒体自噬标志物LC3-II/Ⅰ比值升高，且自噬抑制剂Mdivi-1可逆转SMG-1的促凋亡效应。
结论与价值
科学意义：
- 揭示了神秘果叶中三萜类化合物通过ROS/JNK/p53通路诱导线粒体自噬和凋亡的抗肝癌机制。
- 为天然产物靶向线粒体途径的抗癌药物开发提供了新思路。
应用潜力：
- 神秘果叶可作为抗肝癌候选药物的来源，尤其对耐药性HCC具有潜在疗效。
- 对香豆酰基的引入可能增强三萜类化合物的生物活性，为结构修饰提供方向。
研究亮点
- 结构新颖性：首次发现含对香豆酰基的三萜类化合物（3–6）及罕见三环香豆素木脂素（1–2）。
- 机制深度：从ROS生成、线粒体功能障碍到自噬激活，系统阐明了SMG-1的多靶点作用。
- 方法创新：结合量子化学计算（ECD）和动态自噬流检测技术，提升了天然产物研究的精确性。
其他价值
- 研究得到中国国家自然科学基金（82173695）和广东省基础与应用基础研究基金（2020B1515020033）支持，数据可重复性强。
- 补充材料中提供了详细的NMR谱图和活性数据，可供后续研究参考。
（全文约2000字）