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RBM8A通过结合UPF3B诱导BBC3 mRNA降解促进胃癌进展的分子机制研究
一、作者与发表信息
本研究由Hang Peng（陕西省人民医院普外科）、Long Zhang（西安交通大学第二附属医院呼吸与危重症医学科）、Fang Li（西安交通大学基础医学院细胞生物学与遗传学系/环境与疾病相关基因教育部重点实验室）等共同完成，通讯作者为Jianhua Wang（陕西省人民医院）和Chen Huang（西安交通大学）。研究成果发表于International Journal of Molecular Medicine（2025年5月，卷56期131页），DOI: 10.3892/ijmm.2025.5572。
二、学术背景
研究领域：RNA代谢调控与肿瘤发生。
科学问题：RNA结合基序蛋白8A（RBM8A）在多种癌症中高表达并促进肿瘤进展，但其在胃癌（GC）中的功能及分子机制尚不明确。
背景知识：
1. RBM8A是外显子连接复合体（EJC）核心蛋白，参与mRNA剪接、转运及无义介导的mRNA降解（NMD）。
2. BBC3（Bcl2结合组分3）是促凋亡基因，其失调与肿瘤细胞凋亡逃逸相关。
研究目标：阐明RBM8A在GC中的生物学功能，揭示其通过调控BBC3 mRNA稳定性促进GC进展的机制。
三、研究流程与方法
研究分为7个主要步骤，涵盖生物信息学分析、细胞实验、动物模型及分子机制探索：
临床样本分析
- 样本：80对GC组织及癌旁正常组织（组织芯片来源）。
- 方法：多重免疫组化（mIHC）检测RBM8A表达，HALO软件定量荧光强度。
- 关键结果：GC组织中RBM8A表达较正常组织平均升高1.4倍（最大log2倍数变化1.4，P<0.05）。
体外功能实验
- 细胞系：AGS（胃腺癌细胞）、HGC27（未分化胃癌细胞）、MKN45（转移性胃癌细胞）。
- 干预：转染两种小干扰RNA（siRBM8A-1/2）敲低RBM8A。
- 实验：
- CCK-8增殖实验：72小时后siRBM8A组细胞增殖显著抑制（P<0.05）。
- 流式细胞术：siRBM8A-1使AGS细胞凋亡增加2.9倍，HGC27细胞增加2.3倍（P<0.05）。
- Western blot：凋亡标志物cleaved PARP1和BAX表达上调。
体内肿瘤模型
- 模型：裸鼠皮下移植MKN45细胞（shRBM8A组vs. shNC对照组）。
- 结果：shRBM8A组肿瘤体积减少51.5%，重量降低62.4%（P<0.05）。
转录组与RIP-seq筛选靶基因
- mRNA-seq：RBM8A敲低后筛选408个差异表达基因（DEGs），GO分析显示富集于凋亡相关通路。
- RIP-seq：鉴定2079个RBM8A直接结合的mRNA，包括BBC3。
BBC3功能验证
- 挽救实验：共转染siRBM8A和siBBC3，逆转了siRBM8A诱导的凋亡（凋亡率从5.2倍降至1.3倍）。
RBM8A-BBC3互作机制
- RNA pulldown：BBC3 mRNA探针富集RBM8A蛋白。
- FISH-IF：证实RBM8A与BBC3 mRNA共定位。
- 放线菌素D实验：RBM8A敲低延缓BBC3 mRNA降解（P<0.05）。
UPF3B介导的降解通路
- CoIP-MS：发现RBM8A与UPF3B（NMD通路关键蛋白）相互作用。
- 功能验证：UPF3B过表达逆转RBM8A敲低对BBC3 mRNA的稳定作用。
四、主要结果与逻辑链条
- 临床关联：RBM8A在GC中高表达且与不良预后相关（TCGA数据支持）。
- 功能证据：敲低RBM8A抑制增殖、促进凋亡（体外/体内一致）。
- 靶点鉴定：RIP-seq锁定BBC3为直接靶标，其促凋亡功能被RBM8A抑制。
- 机制解析：RBM8A-UPF3B复合物加速BBC3 mRNA降解，从而抑制凋亡。
五、结论与价值
科学意义：首次揭示RBM8A通过UPF3B依赖的NMD通路降解BBC3 mRNA，促进GC进展，为RNA代谢调控肿瘤提供了新案例。
应用价值：靶向RBM8A-BBC3-UPF3B轴可能成为GC治疗新策略，尤其对化疗耐药患者具有潜在价值。
六、研究亮点
- 多组学整合：结合mRNA-seq、RIP-seq和CoIP-MS，系统性解析RBM8A的分子网络。
- 创新方法：开发了基于组织芯片的mIHC定量技术，提高临床样本分析精度。
- 机制深度：从RNA结合蛋白到NMD通路的级联调控，填补了GC中RBM8A功能的空白。
七、其他价值
研究还提示RBM8A可能通过类似机制参与其他癌症（如乳腺癌、胶质瘤），为跨癌种研究提供了线索。
（报告总字数：约1800字）