本研究由哈尔滨医科大学第一附属医院神经内科的Yilei Sun、Dan Liu、Yanchen Liu和Lijun Chi（通讯作者）团队完成，发表于期刊 *Molecular Neurobiology*（2025年5月27日在线发表）。研究聚焦于免疫检查点分子VISTA（V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T cell activation）在脑缺血-再灌注损伤（CIRI）中的神经保护机制，揭示了其通过调控微胶质细胞代谢重编程减轻神经炎症的新通路。

学术背景

急性缺血性卒中（AIS）是全球致残和致死的主要原因，而再灌注治疗后的缺血-再灌注损伤（CIRI）是加重神经损伤的关键因素。既往研究表明，微胶质细胞（microglia）在CIRI中发挥双重作用：既能通过释放促炎因子（如IL-6、TNFα）加剧损伤，也能通过抗炎因子（如IL-10）促进修复。近年发现，免疫代谢重编程（immunometabolism）是调控微胶质细胞极化的核心机制，其中三羧酸循环（TCA cycle）代谢产物衣康酸（itaconate, ITA）由ACOD1（aconitate decarboxylase 1，又名IRG1）催化生成，具有显著的抗炎作用。然而，ACOD1/ITA通路的上游调控机制尚不明确。本研究首次提出免疫检查点分子VISTA可能通过ACOD1/ITA调控微胶质细胞代谢，从而改善CIRI的假说。

研究流程与方法

研究分为 6个主要环节，结合体内外模型和多组学分析：
1. 差异基因筛选与靶点确认
- 通过分析GEO数据集GSE77986（5例短暂性大脑中动脉闭塞模型小鼠和3例假手术对照），筛选出3294个差异表达基因（DEGs），其中8个为免疫检查点相关基因（DE-ICGs）。VISTA编码基因 VSIR 表达量最高且显著下调，被选为关键靶点。
- 通过qRT-PCR和蛋白质印迹（Western blot，WB）验证了CIRI后脑组织中VISTA表达动态变化：在再灌注第3天降至最低，第7天部分恢复。免疫荧光显示VISTA主要表达于梗死周边的微胶质细胞（Iba1+细胞）。

1. 体内功能验证

   • 采用CX3CR1Cre小鼠结合腺相关病毒AAV-MG1.2-VSIR（脑室注射）特异性过表达微胶质细胞的VISTA，建立短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型。
     
   • 评估指标：
     
     • 神经功能：Longa评分显示VISTA显著改善运动缺陷（评分降低约50%，p<0.01）。
       
     • 梗死体积：TTC染色显示VISTA组梗死面积减少35%（p<0.001）。
       
     • 病理损伤：H&E和尼氏染色证实VISTA减轻神经元坏死和胶质细胞核固缩。
       
     • 炎症调控：ELISA和qRT-PCR显示VISTA降低IL-6、TNFα、IL-1β，同时升高IL-10；免疫荧光显示VISTA促进微胶质细胞向M2型（CD206+）极化。
       

2. 体外机制探索

   • 采用BV2小胶质细胞系构建氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型，转染pCDNA3.1-VSIR过表达VISTA。
     
   • 代谢分析：ELISA检测TCA循环中间产物，发现VISTA显著升高衣康酸（ITA）水平（2.5倍，p<0.001），同时降低柠檬酸和异柠檬酸。
     
   • 转录组测序：RNA-seq分析显示VISTA过表达组中ACOD1表达上调，差异基因富集于NF-κB通路和糖代谢相关通路（GSEA分析）。
     

3. 通路验证

   • WB证实VISTA抑制NF-κB通路关键分子p65和IκBα的磷酸化。通过siRNA敲低ACOD1后，VISTA的抗炎作用（抑制IL-6、促进IL-10）和NF-κB抑制效应被逆转。CCK-8和EdU实验进一步表明ACOD1是VISTA抑制微胶质细胞增殖的必要介质。
     

4. 数据整合

   • 通过生信分析（GO/KEGG）明确VISTA-ACOD1-ITA轴的核心作用，并提出“VISTA通过ACOD1促进ITA生成，抑制IκBα/NF-κB通路”的分子机制模型。
     

主要结果与逻辑关联

• 结果1：VISTA在CIRI后显著下调且与微胶质细胞活化负相关（图1C-G），提示其可能参与调控神经炎症。
  
• 结果2：过表达VISTA减少梗死体积并改善神经功能（图2B-E），且伴随促炎因子下降和抗炎因子上升（图3A-B），表明其具有神经保护潜力。
  
• 结果3：RNA-seq和代谢分析（图6-7）揭示VISTA通过ACOD1重塑TCA循环，增加ITA产量，从而抑制NF-κB通路（图8A）。
  
• 结果4：ACOD1敲低实验（图9）证实该通路必要性，最终完善“VISTA→ACOD1/ITA→IκBα/NF-κB→炎症抑制”的机制链条。
  

结论与价值

本研究首次阐明：
1. 科学价值：VISTA作为微胶质细胞免疫代谢的新调控分子，通过ACOD1介导的ITA生成和NF-κB抑制发挥抗炎作用，为CIRI提供了新的治疗靶点。
2. 应用潜力：靶向VISTA-ACOD1轴的药物（如ITA衍生物）可能为缺血性卒中后的神经保护提供新策略。

研究亮点

• 方法创新：结合CX3CR1Cre小鼠和AAV微胶质细胞特异性过表达技术，实现VISTA的精准调控。
  
• 机制突破：首次将免疫检查点分子与TCA循环代谢联系起来，揭示了“免疫-代谢”交叉调控的新途径。
  
• 临床意义：VISTA的动态变化特征（再灌注第3天最低）为治疗时间窗的选择提供了依据。
  

补充价值

尽管未明确VISTA在中枢神经系统（CNS）的配体，但研究提示其与TLR信号的可能互作（参考文献18,49），为后续研究留出探索空间。作者指出，基于免疫检查点疗法（如PD-1抗体）的临床转化经验，VISTA干预策略具有较高的转化可行性。