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本研究由温州医科大学附属第一医院的林晓滨、陈颖、杨德壕、谢甬淋、毕涌、柯建明、陈志博、苏中钱、厉向和张旭等人共同完成,研究论文发表在《中国病理生理杂志》2016年第1期。该研究主要探讨了人脂肪源性干细胞(human adipose-derived stem cells, hascs)对多发性硬化(multiple sclerosis, ms)患者外周血辅助性t细胞17(t helper 17 cells, th17)的免疫调控作用机制。
多发性硬化(ms)是一种中枢神经系统(central nervous system, cns)慢性脱髓鞘性的自身免疫性疾病,th17细胞在其发病机制中起着关键作用。近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells, mscs)移植为神经系统疾病如ms、脑卒中等治疗带来了希望。人脂肪源性干细胞(hascs)是来源于脂肪的间充质干细胞,具有免疫调节效应,其机制包括细胞之间的接触作用和分泌可溶性的免疫调节因子。白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, lif)是hascs分泌的其中一种免疫调节因子,可通过lif-lif受体(lif receptor, lifr)机制抑制cd4 + t细胞向th17细胞分化。然而,hascs对th17细胞分化的作用及确切机制目前相关报道较少。因此,本研究旨在通过体外实验探讨hascs对ms患者th17细胞的免疫调控作用及其机制。
研究首先从整形外科抽脂手术患者中获取脂肪组织,分离、纯化hascs,并进行原代与传代培养。通过流式细胞术鉴定hascs的表面标志物,确保其纯度。随后,从ms患者外周血中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, pbmcs),采用磁珠分选法获得高纯度的cd4 + t细胞。体外刺激cd4 + t细胞向th17极化,并与不同比例的hascs(hascs∶cd4 + t为1∶4和1∶10)共培养4天。设立添加anti-lif抗体组作为对照。通过流式细胞术检测th17细胞占cd4 + t细胞的比例,real-time pcr检测白细胞介素6受体(interleukin-6 receptor, il-6r)、白细胞介素23受体(interleukin-23 receptor, il-23r)、白血病抑制因子受体(lifr)、维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptor γt, rorγt)及lif的mrna水平变化,elisa法检测共培养体系上清液中lif的水平。
研究结果显示,分离的hascs经流式细胞术鉴定可基本判定为hascs,pbmcs经磁珠法分选后获得90%以上纯度的cd4 + t细胞。共培养后,1∶4组和1∶10组中th17细胞所占比例下降,且存在高浓度抑制效应。共培养后rorγt、il-6r和il-23r的mrna表达水平下降,lifr和lif的mrna表达水平均升高。加入anti-lif抗体后,th17细胞比例回升至对照组水平,rorγt和il-6r的mrna表达水平回升。elisa检测结果显示,共培养组lif分泌均较对照组明显增多,加入anti-lif抗体后明显减少。
研究结论表明,hascs可抑制ms患者th17细胞的分化,其作用可能与其分泌lif、通过il-6 /lif轴竞争性抑制有关。这一发现为利用hascs的免疫调节作用治疗ms提供了新的理论依据。
本研究的亮点在于首次通过体外实验详细探讨了hascs对ms患者th17细胞的免疫调控作用及其机制,揭示了lif在其中的关键作用。此外,研究采用了流式细胞术、real-time pcr和elisa等多种技术手段,确保了实验结果的准确性和可靠性。
本研究不仅为ms的免疫治疗提供了新的思路,也为hascs在其他自身免疫性疾病中的应用提供了理论支持。未来,hascs移植治疗ms患者将具有广阔的临床应用前景。
研究还发现,hascs与cd4 + t细胞共培养后,lif的分泌量显著增加,且这种增加与th17细胞分化的抑制呈正相关。这一发现进一步支持了lif在hascs免疫调节中的重要作用。此外,研究还探讨了il-6 /lif轴在th17细胞和treg细胞分化中的平衡作用,为未来深入研究提供了方向。