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NY-ESO-1 TCR-T细胞联合PD-1阻断治疗实体瘤的增效策略：基于iRGD稳定修饰的肿瘤靶向渗透研究

一、作者与发表信息
本研究由南京大学医学院附属南京鼓楼医院综合癌症中心的Yirong Wu、Lanqun Qin、Zhengyun Zou等团队完成，发表于Cancer Immunology, Immunotherapy期刊（2025年，第74卷，第226页）。研究聚焦肿瘤免疫治疗领域，旨在解决T细胞受体修饰T细胞（TCR-T）疗法在实体瘤治疗中的两大瓶颈：T细胞浸润不足和免疫抑制信号干扰。

二、学术背景
TCR-T疗法通过基因工程使T细胞靶向肿瘤抗原，但在实体瘤中疗效不稳定，临床响应率仅20%-66%。核心问题包括：
1. 浸润障碍：实体瘤致密基质限制T细胞渗透，仅%的输注T细胞能到达肿瘤（Moon et al., 2011）；
2. 免疫抑制：肿瘤微环境（TME）中PD-1/PD-L1等信号导致T细胞耗竭。
本研究提出双重策略：
- 利用肿瘤穿透肽iRGD（序列：CRGDK/RGPD/EC）增强T细胞靶向性。iRGD通过整合素（αvβ3/5）和神经纤毛蛋白-1（NRP-1）双受体介导穿透（Sugahara et al., 2009）；
- 联合PD-1阻断解除免疫抑制。

三、实验流程与方法
1. NY-ESO-1 TCR-T构建
- 基因设计：采用“Sleeping Beauty”转座子系统，将靶向NY-ESO-1抗原（HLA-A*02:01限制性表位SLLMWITQC）的TCRα/β链基因导入外周血淋巴细胞（PBL），并引入鼠源恒定区防止错配。
- 转染验证：电转后第3天，流式检测显示36.9% CD8+ T细胞表达NY-ESO-1特异性TCR（Tetramer染色阳性），且细胞活性和增殖能力未受损（图1b-e）。

1. iRGD稳定修饰

   • 化学偶联：将iRGD与聚乙二醇-磷脂（DSPE-PEG）结合，形成DSPE-PEG-iRGD，通过膜整合修饰T细胞表面。
     
   • 优化条件：60 μg/mL DSPE-PEG-iRGD可饱和修饰10^6个T细胞，修饰后24小时内荧光强度保持80%以上（图3a-e）。
     

2. 体外功能验证

   • 特异性杀伤：NY-ESO-1高表达黑色素瘤细胞A375与TCR-T共培养后，IFN-γ分泌量显著增加（p<0.001），且效应靶比（E:T）为40:1时，杀伤率达70%，显著高于低表达NY-ESO-1的SK-HEP-1细胞（图2f）。
     

3. 体内疗效评估

   • 肿瘤靶向性：iRGD修饰组（iRGD-NY-ESO-1 TCR-T）在A375皮下瘤模型中，6小时即出现近红外信号富集，48小时肿瘤内CD3+ T细胞数量为对照组的3倍（图3f-k）。
     
   • 联合治疗：iRGD-TCR-T联合PD-1阻断后，肿瘤体积减少70%（vs. 单用iRGD-TCR-T），且肿瘤内PD-1+ T细胞比例下降（图5b-f）。
     

四、主要结果与逻辑链条
1. iRGD增强浸润：修饰后的T细胞通过αvβ3/5-NRP-1轴穿透肿瘤血管，早期（48小时）浸润量提升2-3倍（图3j），但长期（22天）因微环境抑制而衰减（图S6）。
2. PD-1阻断协同增效：联合治疗显著降低T细胞PD-1表达（p<0.01），解除耗竭信号，延长抗肿瘤效应（图5f）。

五、结论与价值
1. 科学价值：首次证实iRGD稳定修饰可克服TCR-T实体瘤递送障碍，为联合免疫检查点抑制剂提供机制依据。
2. 应用前景：针对NY-ESO-1阳性实体瘤（如黑色素瘤、肉瘤），该策略可提升临床响应率，且安全性良好（肝肾功能无异常，图S8-S9）。

六、研究亮点
- 创新方法：DSPE-PEG-iRGD膜修饰技术实现T细胞表面稳定偶联，优于游离iRGD共递送（图4d-e）；
- 转化意义：在免疫缺陷鼠模型中模拟人HLA限制性应答，为临床试验设计提供参考。

七、其他发现
- 局限性：需在免疫健全的HLA-A*02:01转基因模型中验证T细胞持久性；
- 扩展性：该技术平台可适配其他肿瘤抗原（如MAGE-A4）的TCR-T开发。

此报告完整呈现了研究的学术逻辑与实验细节，突出了跨学科技术整合（化学生物学+免疫治疗）的创新性，为实体瘤免疫治疗提供了可转化的解决方案。