急性髓系白血病（AML）中假基因POU5F1B低表达对诊断及预后的影响

作者及研究机构
本研究的通讯作者为江苏大学附属人民医院检验科的Zhao-qun Deng（邮箱：zqdeng2002@163.com）。其他作者包括Jing Yi、Ling-yu Zhou、Yun-yun Yi、Xin Zhu、Xiao-yu Su、Qian Zhao、Jiang Lin和Jun Qian，分别来自江苏大学附属人民医院检验科、复旦大学华山医院急诊科及江苏大学附属人民医院血液科。研究发表于《Medical Science Monitor》（Med Sci Monit）期刊，2019年7月4日正式出版，研究获得中国国家自然科学基金（20120016）、江苏省医学创新团队（CXTDB2017002）等多项资助。

学术背景

急性髓系白血病（AML）是一种恶性克隆性疾病，以骨髓中异常髓系祖细胞分化阻滞和积累为特征，成人中发病率随年龄增长而升高。尽管分子遗传学进展（如细胞遗传学和分子异常）已为AML预后提供了重要指标，但非编码RNA（ncRNA，包括miRNA、lncRNA和假基因）在癌症中的作用近年备受关注。假基因曾被视为“垃圾DNA”，但部分假基因可通过竞争性内源RNA（ceRNA）机制调控亲本基因表达，甚至参与肿瘤发生。

OCT-4是维持胚胎干细胞多能性的关键转录因子，其假基因POU5F1B（OCT-4-PG1）在胃癌中过表达且与不良预后相关。然而，POU5F1B在AML中的表达及临床意义尚未明确。本研究旨在评估POU5F1B在初诊AML患者中的表达水平，并探讨其与AML诊断和预后的关联。

研究流程与方法

1. 样本收集与处理

研究纳入175例初诊AML患者和39例健康对照者骨髓样本，所有患者均按WHO和FAB分类标准诊断。骨髓单核细胞（BMNCs）通过淋巴细胞分离液提取，总RNA采用Trizol试剂分离，逆转录为cDNA后储存于-20°C备用。

2. POU5F1B转录水平检测

采用实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测POU5F1B表达。引物设计如下：
- 正向引物：5’-GCGATCAAGCAGCGACTA-3’
- 反向引物：5’-AGGGAAAGGGACTGAGGAG-3’
反应条件包括95°C预变性30秒，随后40个循环的扩增（95°C 5秒，58.1°C 30秒，72°C 30秒，80°C 31秒采集荧光），最终通过熔解曲线分析确认特异性。表达量以管家基因ABL为内参，采用2−ΔΔCt法计算。

3. 基因突变检测

通过PCR和高分辨率熔解曲线分析（HRMA）检测DNMT3A、N/K-RAS、NPM1等基因突变，FLT3-ITD和CEBPA突变则通过PCR直接测序验证。

4. 数据分析

• 统计方法：采用SPSS 22.0软件，连续变量比较使用Mann-Whitney U检验，分类变量采用Fisher精确检验或卡方检验。
  
• 诊断价值评估：通过受试者工作特征曲线（ROC）分析POU5F1B区分AML患者与健康对照的能力。
  
• 生存分析：采用Kaplan-Meier法评估POU5F1B表达对总生存期（OS）和无白血病生存期（LFS）的影响，Cox回归模型分析其独立预后价值。
  

主要研究结果

1. POU5F1B在AML中低表达

AML患者POU5F1B表达显著低于健康对照（中位数0.0536 vs. 0.7991，p<0.001），且在非急性早幼粒细胞白血病（non-APL）和中危AML亚组中同样低表达（p<0.001）。

2. 诊断价值

ROC曲线显示，POU5F1B可区分AML患者与健康对照（AUC=0.682，95%CI: 0.579–0.786），在non-APL和中危AML中AUC分别为0.683和0.663。

3. 临床特征关联

• non-APL AML：POU5F1B低表达组白细胞计数（WBC）显著高于高表达组（20.2×10⁹/L vs. 4.6×10⁹/L，p=0.021）。
  
• 治疗反应：POU5F1B高表达组完全缓解率（CR）显著更高（全队列AML p=0.012，non-APL p=0.012，中危AML p=0.027）。
  

4. 预后意义

• 生存分析：POU5F1B高表达组OS显著延长（全队列中位17 vs. 7个月，p=0.019；non-APL中位12 vs. 5个月，p=0.007；中危AML中位12 vs. 4.5个月，p=0.046）。
  
• 多因素分析：POU5F1B是non-APL和中危AML患者OS的独立有利预后因素（HR=0.453，p=0.014；HR=0.448，p=0.023）。
  

结论与意义

本研究首次揭示POU5F1B在AML中普遍低表达，且其表达水平与WBC计数、CR率和OS显著相关，提示其可作为AML诊断和预后的潜在生物标志物。可能的机制包括：
1. ceRNA调控：POU5F1B与亲本基因OCT-4高度同源，可能通过竞争miRNA结合位点解除OCT-4的抑制，而OCT-4高表达已知与AML不良预后相关。
2. 表观遗传调控：假基因衍生的lncRNA可能通过招募染色质修饰复合物（如SUV39H1）沉默OCT-4启动子。

科学价值：为AML的分子分型提供了新靶点，并为假基因功能研究提供了临床证据。
应用价值：POU5F1B检测或可辅助AML早期诊断和风险分层，指导个体化治疗。

研究亮点

1. 创新性：首次系统评估POU5F1B在AML中的表达及临床意义。
   
2. 方法学严谨性：结合多组学分析（表达检测、突变谱、生存模型），数据覆盖全队列及亚组。
   
3. 转化潜力：提出假基因作为ceRNA调控网络的组成部分，为AML治疗提供新思路。
   

局限性：需进一步通过功能实验验证POU5F1B与OCT-4的调控关系，并扩大样本验证其在各亚型中的普适性。

注：全文可通过链接访问：Med Sci Monit全文。