这篇文档属于类型a，即报告了一项原创性研究。以下是针对该研究的学术报告：

一、作者与发表信息
本研究由Huijuan Jin、Zhifang Li、Senwei Tan等共同完成，通讯作者为Bo Hu。作者单位包括华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科、天津医科大学总医院天津神经病学研究所神经内科，以及加拿大卡尔加里大学Cumming医学院社区健康科学系等。研究发表于《Advanced Science》期刊，在线发表时间为2025年（DOI: 10.1002/advs.202503722）。

二、学术背景
研究领域为缺血性卒中（ischemic stroke）后的神经炎症机制。急性缺血性卒中（acute ischemic stroke, AIS）是全球致残和致死的主要原因，而缺血再灌注（ischemia-reperfusion）后的神经炎症是疾病进展的关键因素。中性粒细胞（neutrophils）和小胶质细胞（microglia）在脑缺血后的相互作用尚不明确。本研究旨在揭示中性粒细胞通过分泌骨髓相关蛋白14（myeloid-related protein 14, MRP14/S100A9）调控小胶质细胞功能（如吞噬作用和焦亡，pyroptosis）的机制，并探索其作为治疗靶点的潜力。

三、研究流程与方法
1. 临床样本分析
- 研究对象：414例AIS患者（来自TRAIS多中心队列），根据脑水肿严重程度分组（轻/重度）。
- 方法：通过RNA测序和血浆蛋白质组学分析中性粒细胞基因表达差异；ELISA检测血浆MRP14水平。

1. 动物模型构建

   • 研究对象：C57BL/6J野生型（wild type, WT）和MRP14基因敲除（knockout, KO）小鼠。
     
   • 方法：建立短暂性大脑中动脉闭塞（transient middle cerebral artery occlusion, tMCAO）模型；通过抗Ly6G抗体耗竭中性粒细胞；静脉注射MRP14抑制剂Paquinimod或重组MRP14蛋白。
     

2. 细胞实验

   • 研究对象：原代小胶质细胞、星形胶质细胞和骨髓来源的中性粒细胞。
     
   • 方法：氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R）模拟缺血再灌注损伤；共培养体系评估细胞间相互作用；TLR4/NF-κB通路抑制剂（如Resatorvid）干预。
     

3. 单细胞RNA测序（scRNA-seq）

   • 方法：从tMCAO小鼠缺血脑组织中分离小胶质细胞，通过Harmony算法整合数据，UMAP可视化聚类，分析差异表达基因（DEGs）和功能通路。
     

4. 血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）完整性评估

   • 方法：伊文思蓝（Evans blue）渗出实验、紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin等）免疫荧光染色、跨内皮电阻（TEER）测定。
     

5. 分子机制验证

   • 方法：Western blot检测焦亡相关蛋白（NLRP3、caspase-1、IL-1β等）；双荧光素酶报告实验验证转录因子C/EBPβ对MRP14的调控。
     

创新方法：
- 开发了微胶质细胞特异性TLR4条件敲除小鼠（TLR4flox/flox; CX3CR1-CreERT）。
- 结合单细胞测序和伪时间轨迹分析，揭示小胶质细胞从吞噬表型向焦亡表型的动态转化。

四、主要结果
1. 临床关联性
- 患者血浆MRP14水平与脑水肿严重程度正相关（p<0.01），且中性粒细胞“脱颗粒（degranulation）”通路显著富集。

1. 中性粒细胞-MRP14的作用

   • tMCAO后，缺血脑组织中MRP14表达峰值出现在24小时，且主要与浸润的中性粒细胞共定位（免疫荧光验证）。
     
   • MRP14 KO或Paquinimod治疗显著减轻BBB破坏（Evans blue渗出减少50%）和脑梗死体积（p<0.01）。
     

2. 小胶质细胞功能调控

   • scRNA-seq发现MRP14 KO小鼠中吞噬相关小胶质细胞（Cluster 1）比例增加，而焦亡相关亚群（Cluster 0）减少。
     
   • 体外实验证实MRP14通过TLR4/NF-κB通路抑制小胶质细胞吞噬功能（CD68表达下降60%）并促进焦亡（IL-1β释放增加2倍）。
     

3. 正反馈循环

   • 焦亡小胶质细胞释放的IL-1β通过IL-1R1/MAPK/C/EBPβ通路上调中性粒细胞MRP14表达，形成炎症放大环路。
     

五、结论与意义
1. 科学价值：首次揭示中性粒细胞来源的MRP14通过“别吃我”（don’t eat me）和“杀死你”（kill you）双信号机制，驱动小胶质细胞功能失调和神经炎症恶性循环。
2. 应用价值：靶向MRP14（如Paquinimod）可特异性阻断炎症环路，避免广谱抗炎治疗的副作用，为缺血性卒中提供新治疗策略。

六、研究亮点
1. 机制创新：提出MRP14-TLR4轴是中性粒细胞-小胶质细胞交叉对话的核心枢纽。
2. 技术整合：结合临床队列、多组学分析和条件性基因敲除模型，全面验证假说。
3. 转化潜力：MRP14抑制剂已进入临床试验（如心肌梗死），本研究为其在卒中领域的应用提供理论依据。

七、其他价值
研究强调了针对特定炎症靶点（而非全局抑制）的重要性，为其他神经退行性疾病的免疫调控研究提供范式。