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系统性红斑狼疮患者中CD14+HLA-DR−/low髓系来源抑制性细胞的增加与疾病严重程度呈iNOS依赖性相关的研究报告

作者与机构
本研究由Zhitao Wang、Fengfeng Zhu、Jiyu Wang等共同完成，第一作者Zhitao Wang来自安徽医科大学第二附属医院血液科，通讯作者Zhimin Zhai（邮箱：aydxyk@163.com）来自同一机构。合作单位包括安徽医科大学第二附属医院风湿免疫科和澳大利亚悉尼大学Westmead Millennium研究所移植与肾脏研究中心。研究于2019年5月29日发表在《Frontiers in Immunology》（免疫学前沿），卷10，文章编号1202，DOI: 10.3389/fimmu.2019.01202。

学术背景
系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种常见的自身免疫性疾病，以自身抗原耐受失衡、T/B细胞过度活化及多器官炎症损伤为特征。尽管已有研究探讨了免疫调节机制，但髓系来源抑制性细胞（Myeloid-Derived Suppressor Cells, MDSCs）在SLE中的作用尚不明确。MDSCs是一类具有免疫抑制功能的未成熟髓系细胞，在肿瘤微环境中被广泛研究，但其在自身免疫疾病中的角色存在争议。本研究旨在明确SLE患者中单核型MDSCs（m-MDSCs，表型为CD14+HLA-DR−/low）的病理作用及其机制，并探索其作为生物标志物或治疗靶点的潜力。

研究流程与方法
1. 研究对象与分组
- 纳入32例新诊断的SLE患者（2016年5月至2018年3月），根据SLE疾病活动指数（SLEDAI）分为活动组（SLEDAI > 9，n=18）和非活动组（SLEDAI ≤ 9，n=14），同时匹配30例健康对照。
- 排除合并肿瘤或其他免疫相关疾病的患者。所有患者接受糖皮质激素、环磷酰胺或甲氨蝶呤治疗，治疗前后采集外周血样本。

1. m-MDSCs的表型分析与功能验证

   • 流式细胞术：使用APC标记的CD14、ECD标记的HLA-DR等抗体，通过Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞（PBMCs），检测m-MDSCs（CD14+HLA-DR−/low）频率。
     
   • 免疫抑制功能实验：分选m-MDSCs与自体CD4+T细胞共培养，通过CFSE染色评估T细胞增殖抑制能力，ELISA检测IFN-γ分泌水平。
     

2. 分子机制研究

   • RT-PCR：检测PBMCs中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶-1（Arg-1）的mRNA表达。
     
   • ELISA：测定血浆中GM-CSF、IL-6和Arg-1的浓度。
     
   • 体外诱导实验：用SLE患者血浆培养健康对照的PBMCs，观察m-MDSCs的扩增，并加入iNOS抑制剂L-NMMA或Arg-1抑制剂Nor-NOHA验证关键通路。
     

3. 数据分析

   • 使用SPSS 17.0进行统计学分析，包括Mann-Whitney U检验、t检验和Pearson相关性分析，显著性阈值设为p < 0.05。

主要结果
1. m-MDSCs在SLE患者中显著增加
- SLE患者外周血中m-MDSCs频率显著高于健康对照（p < 0.01），且与疾病活动度正相关（r = 0.547）。女性患者和狼疮肾炎患者的m-MDSCs水平更高（p < 0.05）。

1. m-MDSCs的免疫抑制功能

   • m-MDSCs可显著抑制CD4+T细胞增殖（CFSE稀释率降低）及IFN-γ分泌（p < 0.01），而CD14+HLA-DR+细胞无此作用。
     

2. iNOS依赖性机制

   • SLE患者iNOS mRNA表达显著升高（p < 0.01），且iNOS抑制剂L-NMMA可逆转m-MDSCs的免疫抑制效应，Arg-1抑制剂则无此作用。
     

3. 细胞因子诱导的m-MDSCs扩增

   • SLE患者血浆中GM-CSF和IL-6水平升高（p < 0.01），体外实验证实其可诱导健康对照PBMCs中m-MDSCs的扩增。
     

结论与意义
本研究首次揭示m-MDSCs通过iNOS依赖性途径参与SLE的免疫抑制，其水平与疾病活动度相关，且治疗后显著下降，提示其可作为疗效监测的生物标志物。此外，靶向m-MDSCs或iNOS通路可能为SLE治疗提供新策略。

研究亮点
1. 创新性发现：明确了m-MDSCs在SLE中的病理作用及iNOS的关键机制，填补了自身免疫疾病中MDSCs功能研究的空白。
2. 临床价值：m-MDSCs的动态变化为疾病活动度和治疗响应提供了潜在评估工具。
3. 方法学严谨性：结合流式分选、功能实验和分子机制验证，形成完整证据链。

其他价值
研究还提示GM-CSF和IL-6可能是驱动m-MDSCs扩增的潜在治疗靶点，为后续研究奠定了基础。