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本研究的主要作者包括Waqas N. Baba、Priti Mudgil、Bincy Baby、Ranjit Vijayan、Chee-Yuen Gan和Sajid Maqsood。研究机构为阿拉伯联合酋长大学食品营养与健康系、生物学系以及马来西亚理科大学分析生物化学研究中心。该研究于2021年发表在《Journal of Dairy Science》期刊上，卷号为104，页码为7393-7405。
高胆固醇血症和肥胖是全球范围内日益严重的健康问题，与心血管疾病、高血压和癌症等多种致命疾病相关。目前，常用的药物如他汀类、烟酸、依折麦布和纤维酸类药物虽然有效，但伴随代谢副作用，如肌病和胃肠道疾病。因此，开发更安全、经济的辅助治疗方法具有重要意义。过去十年中，牛奶水解物因其含有多种生物活性肽（Bioactive Peptides, BAP）而受到关注，这些肽具有抗氧化、抗高血压、抗糖尿病和抗癌等多种健康益处。然而，非牛乳来源的BAP，如骆驼乳或山羊乳，因其潜在的健康益处而逐渐成为研究热点。骆驼乳蛋白水解物已被报道具有抗氧化、抗糖尿病、抗肥胖和抗高血压等特性。本研究旨在探索骆驼乳清蛋白水解物（Camel Whey Protein Hydrolysates, CWPH）在不同水解条件下对胆固醇酯酶（Cholesterol Esterase, CE）和胰脂肪酶（Pancreatic Lipase, PL）的抑制潜力，并鉴定其中的新型BAP序列。
研究流程包括以下几个主要步骤：
材料准备：从阿联酋阿布扎比当地骆驼农场获取新鲜骆驼乳样品，经过两次离心去除脂肪，再通过酸沉淀法分离乳清蛋白。乳清蛋白在-20°C下冷冻干燥，并在3天内冻干。
水解实验设计：使用胃蛋白酶在不同酶浓度（0.5%、1%、2%）、不同温度（30°C、37°C、45°C）和不同时间（120、240、360分钟）条件下对乳清蛋白进行水解，生成27种不同的水解物（CWPH1至CWPH27）。每种水解物制备三个批次作为重复。
肽谱分析：使用反相超高效液相色谱（RP-UPLC）分析水解物的肽谱，鉴定主要和次要蛋白质的降解情况。
酶抑制活性测定：分别测定CWPH对CE和PL的抑制活性，计算半数抑制浓度（IC50值）。CE抑制活性通过测定p-硝基苯酚的释放量来确定，PL抑制活性通过测定p-硝基苯基丁酸酯的水解产物来确定。
肽序列鉴定：使用液相色谱-质谱联用（LC-MS QTOF）对选定的水解物进行肽序列鉴定，并通过Peptide Ranker网络服务器进行肽的活性评分。
分子对接分析：使用PepSite 2网络程序进行分子对接，预测肽与目标酶的结合机制。通过Schrödinger Suite软件进行蛋白质结构优化和分子对接，计算结合自由能。
肽谱分析：RP-UPLC分析显示，水解物中的主要和次要蛋白质均被成功降解，生成了一系列短肽峰，表明水解物中含有广泛疏水性的肽。
酶抑制活性：所有CWPH均显示出比未水解的骆驼乳清蛋白（CWP）更高的CE和PL抑制活性，IC50值显著降低。特别是CWPH19在45°C、2%酶浓度和120分钟条件下生成的IC50值最低，分别为0.46 mg/ml（PL）和0.253 mg/ml（CE）。
肽序列鉴定：从CWPH7、CWPH16和CWPH18中鉴定出141个肽序列，其中12个肽的Peptide Ranker评分≥0.8。这些肽的氨基酸残基数在2至15之间，显示出较高的疏水性。
分子对接：肽PAGNFLPPVAAAPVM、MLPLMLPFTMGY和LRFPL被鉴定为潜在的PL抑制剂，而FCCLGP VPP被鉴定为潜在的CE抑制剂。分子对接结果显示，这些肽能够与目标酶的活性位点结合，形成亲水和疏水相互作用。
骆驼乳清蛋白水解物是潜在的脂质代谢调节剂，能够通过抑制CE和PL酶活性来影响胆固醇代谢。本研究鉴定了多种新型肽序列，这些肽具有潜在的CE和PL抑制活性，可作为高胆固醇血症的辅助治疗候选物。特别是CWPH19在低酶浓度下生成的高效抑制肽，具有经济高效的潜力。
本研究还探讨了水解条件对酶抑制活性的影响，发现酶浓度、温度和时间之间存在显著的交互作用，为优化水解工艺提供了理论依据。此外，研究还发现某些肽能够同时抑制多种酶，具有多重生物活性，进一步增加了其应用价值。
通过本研究，不仅为骆驼乳清蛋白水解物的开发提供了科学依据，也为高胆固醇血症的治疗提供了新的研究方向。