长链非编码RNA Linc01526通过TARBP2介导的GNG7 mRNA降解促进胃癌增殖和转移的研究报告

作者及发表信息
该研究由南京中医药大学附属江苏省中医院的Jin-Yong Zhou（共同第一作者）、Yu Tao、Chen Chen、Shen-Lin Liu（通讯作者）团队，与南京医科大学附属苏州医院乳腺甲状腺外科的Jin-Yan Liu（共同第一作者）合作完成，发表于2022年10月的期刊《Cancers》（影响因子6.575）。文章标题为《LINC01526 Promotes Proliferation and Metastasis of Gastric Cancer by Interacting with TARBP2 to Induce GNG7 mRNA Decay》，DOI号为10.3390/cancers14194940。

学术背景
胃癌（GC）是全球发病率第五、死亡率第四的恶性肿瘤，早期症状隐匿且易产生耐药性，亟需新的生物标志物和治疗靶点。长链非编码RNA（lncRNA，long non-coding RNA）在肿瘤发生发展中发挥重要作用，但其机制尚未完全阐明。研究团队此前通过生物信息学分析发现LINC01526可能是胃癌预后标志物，但其功能机制未知。本研究的科学目标是：（1）验证LINC01526在胃癌中的表达水平及临床意义；（2）解析其通过RNA结合蛋白TARBP2（HIV-1 TAR RNA-binding protein 2）调控下游基因GNG7（G蛋白γ亚基7）的分子机制，为胃癌诊疗提供新靶点。

研究流程与方法
1. 生物信息学分析与临床样本验证
- 数据来源：从TCGA数据库获取375例胃癌组织和32例正常组织的RNA测序数据，分析LINC01526表达水平与患者预后的关联。
- 实验验证：通过荧光原位杂交（FISH）检测28对胃癌及癌旁组织中LINC01526的亚定位（细胞质富集），RT-qPCR验证4种胃癌细胞系（HGC-27、AGS、SNU-1、HS746T）中LINC01526表达显著高于正常胃上皮细胞GES-1。

1. 功能实验（体外与体内）

   • 体外实验：在HGC-27和AGS细胞中敲低LINC01526（siRNA转染），通过CCK-8、Edu标记、克隆形成实验证实其抑制细胞增殖；Transwell实验显示迁移能力下降；TUNEL实验表明凋亡增加。
     
   • 体内实验：构建裸鼠模型，皮下注射sh-LINC01526稳定转染的HGC-27细胞，15天后肿瘤体积和重量显著减少（*p<0.01**）；尾静脉注射模型显示肺转移结节数减少，免疫荧光提示上皮-间质转化（EMT）标志物E-cadherin上调、N-cadherin和Vimentin下调。
     

2. 机制解析

   • 互作蛋白筛选：RNA pull-down联合质谱（LC-MS/MS）鉴定出与LINC01526结合的45个蛋白，其中TARBP2结合肽段最多；Western blot和RNA免疫沉淀（RIP）验证二者直接互作。
     
   • 下游靶标筛选：对TARBP2敲低细胞进行RNA测序，发现313个上调基因（如抑癌基因CDKN2A、GNG7、GSDMD）。RNA稳定性实验表明，过表达TARBP2显著缩短GNG7 mRNA半衰期（从>8小时降至小时）。
     
   • 结构分析：使用TEISER算法预测GNG7的3’UTR区存在11个TARBP2结合的GC富集结构元件（SRSE）。RIP-qPCR证实LINC01526增强TARBP2对GNG7 mRNA的结合能力。
     

3. 挽救实验验证通路
   在敲低LINC01526或TARBP2的细胞中同时沉默GNG7，可部分恢复细胞增殖和迁移能力（CCK-8和Transwell结果，**p<0.01），表明GNG7是该通路的关键效应分子。

主要结果与逻辑关联
1. 临床相关性：LINC01526高表达与胃癌患者总生存期缩短显著相关（HR=1.5, p=0.003）。
2. 功能表型：敲低LINC01526抑制癌细胞增殖、迁移并促进凋亡，体内实验进一步验证其促癌作用。
3. 机制证据：
- LINC01526与TARBP2形成复合体，后者通过SRSE结合GNG7 mRNA并加速其降解。
- GNG7作为抑癌基因，其表达水平与LINC01526/TARBP2负相关（r=-0.62, p<0.001），且低GNG7表达患者预后更差。
4. 通路完整性：挽救实验确认“LINC01526-TARBP2-GNG7”轴的因果性，即LINC01526依赖TARBP2调控GNG7稳定性。

结论与价值
本研究首次揭示LINC01526通过招募TARBP2降解GNG7 mRNA，促进胃癌进展的分子机制。其科学价值在于：
1. 理论层面：阐明了lncRNA通过RNA结合蛋白调控mRNA稳定性的新机制，扩充了ncRNA在转录后调控中的功能认知。
2. 应用潜力：LINC01526或可作为胃癌诊断标志物和靶向治疗靶点（如设计靶向LINC01526-TARBP2结合界面的抑制剂）。

研究亮点
1. 创新性发现：首次报道LINC01526-TARBP2-GNG7轴在胃癌中的作用，填补了该lncRNA的功能空白。
2. 方法学特色：整合多组学（转录组、蛋白质互作组）和生物信息学工具（TEISER算法预测RNA结构元件），为类似研究提供范式。
3. 转化医学意义：临床样本与动物模型的紧密结合，增强了结论的可靠性。

局限性
作者指出，siRNA的瞬时敲低可能存在脱靶效应，未来需采用稳定敲除模型进一步验证。此外，GNG7下游如何通过p27kip1等分子调控细胞周期仍需深入探索。