本研究由南方医科大学中医药学院的Kaili Deng、Min Li等作者共同完成，并于2025年发表在期刊《Phytomedicine》上。研究题为《Integrated UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS and serum pharmacochemistry for the investigation of anti-hepatic fibrosis effect of Baoganning decoction》，聚焦于中药复方保肝宁（Baoganning decoction, BGN）抗肝纤维化（hepatic fibrosis, HF）的药效物质基础及作用机制。
学术背景
肝纤维化是慢性肝病的核心病理特征，与肝硬化及肝癌的发生密切相关。尽管早期干预可逆转纤维化进程，但目前尚无获批的抗纤维化药物。传统中药（Traditional Chinese Medicines, TCMs）如安络化纤丸（Anluohuanxian formula）和扶正化瘀方（Fuzhenghuayu formula）已显示出多靶点抗纤维化潜力。基于40余年临床经验，吕志平教授研发的BGN复方（专利号：ZL200610035753.1）在改善乙肝相关肝纤维化患者症状和肝功能指标方面表现突出，但其复杂化学成分限制了其国际化应用。本研究通过整合超高效液相色谱-高分辨质谱（UHPLC-HRMS）和血清药物化学（serum pharmacochemistry）技术，系统解析BGN的活性成分及其作用机制。
研究流程
BGN药效验证
- 动物模型：采用CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型，分为对照组、模型组、阳性药（安络化纤丸）组及BGN低、中、高剂量组（1.274、2.548、5.096 g/ml），干预6周。通过检测血清AST、ALT水平，H&E、Masson和天狼星红染色评估肝组织病理变化，Western blot（WB）和qRT-PCR分析α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白）表达。
- 结果：BGN显著降低AST/ALT水平（p<0.05），减轻肝组织纤维化和炎症浸润，其中低剂量组（BGN-L）效果最佳。
化学成分分析
- UHPLC-HRMS技术：通过正负离子模式检测BGN水煎液，结合LUMET-CM 2.0数据库比对，鉴定出757种化合物，包括萜类（200种）、氨基酸（103种）等。
- 血清原型成分鉴定：分析大鼠含药血清，发现18种原型成分（如奎宁酸、甲基胆酸酯）及其代谢产物，涉及磺化、乙酰化等II相代谢反应。
网络药理学与分子对接
- 靶点预测：通过SwissTargetPrediction和疾病数据库（GeneCards、DisGeNET）筛选出291个BGN与HF的共同靶点，核心靶点包括STAT3、PI3KCA、EGFR等。
- 通路富集：KEGG分析显示PI3K/AKT和MAPK信号通路与BGN抗纤维化密切相关。分子对接证实奎宁酸与STAT3（结合能-7.3 kcal/mol）、甲基胆酸酯与PI3KCA（-7.1 kcal/mol）具有稳定结合。
体外与斑马鱼验证
- 细胞实验：10%含药血清显著抑制HSC-T6和JS-1细胞增殖（p<0.05），下调α-SMA和COL-I表达，并抑制PI3K/AKT通路活性。
- 斑马鱼模型：甲基胆酸酯（25 μM）和3β-羟基-5-胆烯酸（3β）减轻硫代乙酰胺（TAA）诱导的肝纤维化，胶原沉积减少50%以上（p<0.01）。
主要结果与逻辑关联
- 化学基础：BGN的757种成分中，18种原型成分入血，其中奎宁酸、甲基胆酸酯和3β通过剂量依赖性抑制HSC活化。
- 机制阐明：网络药理学与分子动力学模拟（GROMACS软件）显示，上述成分通过PI3K/AKT和MAPK通路调控STAT3等靶点，抑制HSC活化。体外实验进一步验证了含药血清的抗纤维化效果。
- 模型验证：小鼠和斑马鱼模型中，BGN及其活性成分均显著改善纤维化表型，形成“化学成分-靶点-通路-药效”的完整证据链。
结论与价值
本研究首次系统解析了BGN的抗肝纤维化物质基础及多靶点作用机制，提出“血清药物化学-网络药理学-实验验证”的研究框架，为中药复方的国际化应用提供了方法论示范。其科学价值在于：
1. 技术创新：整合UHPLC-HRMS与分子动力学模拟，提升了中药复杂成分研究的精确性。
2. 临床意义：明确BGN的核心活性成分（如奎宁酸）及机制，为其标准化生产和适应症拓展奠定基础。
研究亮点
- 多学科融合：首次将血清药物化学、斑马鱼模型与分子对接技术结合，全面阐释BGN的“成分-靶点-通路”网络。
- 发现新活性成分：奎宁酸和甲基胆酸酯为首次报道的抗肝纤维化成分，拓展了萜类化合物的药理认知。
- 转化潜力：研究策略可推广至其他中药复方研究，加速中药现代化进程。
其他价值
研究获得国家自然科学基金（82405073等）和广东省中医药局项目支持，相关实验方案经南方医科大学伦理委员会批准（SMUL202403002），数据可重复性强，为后续临床研究提供了扎实的临床前证据。