这篇文章为类型a。
作者：文章的主要作者包括Dan Huang, Zhipeng Wu, Zhengyi Wu, Nuoya Li, Liang Hao, Kuangfan Li, Junquan Zeng, Bingbing Qiu, Shouhua Zhang, 和Jinlong Yan，隶属于中国江西省南昌大学及其相关附属医院的多个科室。该研究发表在《Molecular Cancer Therapeutics》期刊的2024年5月（第23卷第5期，721–732页）。
研究领域：本研究属于癌症治疗领域，具体针对小儿恶性肿瘤——肉瘤（pediatric sarcoma）的治疗。
研究动机：小儿肉瘤，如横纹肌肉瘤（Rhabdomyosarcoma, RMS）、尤文氏肉瘤（Ewing sarcoma, ES）和横纹状瘤（Rhabdoid tumor, RT），具有恶性程度高、增长迅速的特点。虽然手术、放化疗是常见的治疗手段，但对于晚期病例的预后仍然较差。此外，传统的化疗药物如环磷酰胺虽然常被使用，但其毒性较高，可能引发骨髓抑制及肝脏、肾脏等组织损伤。因此，探索新的治疗策略成为该领域的重要课题。
背景知识：Everolimus是一种mTOR抑制剂，临床上已被用于治疗儿童高级别肾细胞癌，但其在小儿肉瘤背景下的研究仍较为有限。已有研究证实，mTOR信号通路在小儿肉瘤的发病中发挥重要作用。
研究目标：本研究旨在验证Everolimus在小儿肉瘤模型中的抗肿瘤作用，以及这一过程是否与IL17A的产生相关，并探讨通过联合Secukinumab（一种针对白介素17A的单克隆抗体）能否增强Everolimus的抗肿瘤效果。
建立RMS患者来源的异种移植模型（Patient-Derived Xenograft, PDX）： - 样本来源：肿瘤样本取自一名4岁女性胚胎型横纹肌肉瘤患者。所有实验均按照《赫尔辛基宣言》开展，并获得患者监护人书面知情同意。 - 建模过程：肿瘤组织切为3mm³大小的颗粒后，移植至BALB/c裸鼠的肩胛前区。P1代肿瘤移植后，待其体积达到800mm³，再分离后移植至更多健康裸鼠中，生成P3及P4代PDX模型。
体内实验中的药物疗效评估： - 分组与药物处理：P4代PDX模型按随机分组分为环磷酰胺组、Everolimus组、环磷酰胺+Everolimus联合组和对照组，每组包含6只小鼠；分别给予对应药物处理。 - 数据收集：通过测量肿瘤体积、动物体重，以及组织毒性相关数据，评估药物安全性与疗效。
体外实验的细胞研究： - 细胞培养：从横纹肌肉瘤和尤文氏肉瘤病人处分离的细胞系A-204和A-673被分别培养用于研究。研究组分为Everolimus处理组、Secukinumab组、Everolimus+Secukinumab联合组和对照组。 - 主要实验： 1. 采用CCK8细胞增殖分析检测药物的细胞毒性。 2. 使用ELISA检测细胞培养液中IL17A浓度。 3. 通过免疫荧光与定量聚合酶链式反应（qPCR）评估IL17A的表达水平。 4. ｢Western Blot｣分析mTOR及IL17A相关信号蛋白的表达。
联合用药研究： - 通过体内（CDX和PDX小鼠模型）与体外（细胞实验）联合Everolimus与Secukinumab治疗，探索二者协同作用的效果及分子机制。
PDX模型中的抗肿瘤效果： - Everolimus显著抑制了肿瘤生长，减少了Ki67阳性细胞比例（反映细胞增殖指标），降低了肿瘤微血管密度（CD31检测），说明其有效抑制了肿瘤的增殖和血管生成。 - 然而，与传统药物环磷酰胺相比，Everolimus的抗肿瘤效果仍然有限。 - 重要发现：Everolimus处理后，肿瘤组织中IL17A的表达显著上调。这提示IL17A可能是限制其抗肿瘤效果的关键因素。
IL17A在体内与体外的作用： - 体外研究显示，Everolimus不仅能剂量依赖性地抑制肉瘤细胞的增殖，还强烈促进IL17A及其受体（IL17RA）的表达。 - Western Blot分析表明，Everolimus抑制了mTOR信号通路中的S6K1磷酸化，同时也明显增强了与IL17信号相关的STAT3磷酸化。
联合用药的协同作用： - Secukinumab单独处理对肉瘤细胞增殖有抑制作用，但与Everolimus联合使用时，表现出更强的协同抑制作用（CI值 < 0.9）。 - 联合治疗显著下调了肿瘤组织及细胞中IL17A与STAT3的表达水平，同时不影响Everolimus对mTOR信号的抑制作用。
结论： 1. Everolimus通过抑制mTOR信号通路，具有抗小儿肉瘤的作用，但其疗效受到IL17A上调的限制。 2. IL17A可能通过激活STAT3信号促进肿瘤细胞存活，并抵消Everolimus的抗肿瘤效果。 3. 与Secukinumab联合治疗能消除IL17A的不良作用，从而显著增强Everolimus的疗效。
意义： 1. 本研究揭示了Everolimus在小儿肉瘤治疗中的局限性及其潜在抵抗机制。 2. 提出了针对IL17A的联合治疗策略，为小儿恶性肉瘤的精准治疗提供了新的思路。 3. 本研究在体内和体外层面验证了联合用药的有效性，具有重要的科学价值及潜在的临床应用前景。