这篇文档属于类型a，即报告了一项原创研究。以下是针对该研究的学术报告：

主要作者及机构：由美国农业部农业研究服务局（USDA-ARS）的Chin-Yi Chen、Cheryl M. Armstrong、Yiping He等团队与Pathotrak Inc.的Javier Atencia等合作完成，发表于期刊《Foods》2025年3月25日第14卷第7期。

学术背景：食源性病原体检测是食品安全的关键环节，传统方法依赖耗时增菌步骤和单一病原体检测，限制了检测效率。该研究针对生禽肉中沙门氏菌（Salmonella）、大肠杆菌（Escherichia coli O157）、弯曲菌（Campylobacter）和李斯特菌（Listeria）的多重同步检测需求，开发了一种免增菌的快速检测流程。研究背景指出，传统增菌方法存在培养条件特异性强（如USDA-FSIS对沙门氏菌和李斯特菌使用不同培养基）、检测周期长（需数小时至数天）以及可能产生假阴性等问题。

研究流程： 1. 样本制备
- 研究对象：生鸡胸肉样本（325g/样本），人工接种5 CFU/g和25 CFU/g浓度的病原体混合液（含四种目标菌）。
- 创新方法：使用Pathotrak新一代提取（NGE）系统，通过等静压将样本中的细菌分离至捕获膜，再用1 mL PBS洗脱并离心浓缩至20 μL。该系统可在3小时内完成96个样本处理，较传统增菌法显著缩短时间。

1. 分子检测

   • 使用Neogen分子检测系统（MDS）结合环介导等温扩增（LAMP）技术，对浓缩样本进行多重检测。
     
   • 实验设计：建立标准曲线（10²~10⁸ CFU/mL梯度稀释），评估检测限；通过6×6平板计数验证接种浓度。
     

2. 数据分析

   • 采用四参数逻辑（4PL）回归模型分析时间-检测信号（RLUs）关系，计算时间阈值（TTD）。
     
   • 统计方法：Cohen’s Kappa系数评估检测一致性，Shapiro-Wilk检验数据正态性。

主要结果： 1. Pathotrak系统性能
- 压力循环后样本袋中残留中位重量仅6%（IQR:4-7%），自动化移液器较手动操作显著提高体积一致性（均值20.4 vs. 27.8 μL，p<0.0001）。

1. 标准曲线分析

   • 所有病原体TTD与浓度对数呈负相关，但灵敏度差异显著：弯曲菌（Campylobacter）线性最佳（R²=0.970），而单核细胞增生李斯特菌（L. monocytogenes）在低浓度（10⁴ CFU/mL）即出现假阴性。
     

2. 禽肉样本检测

   • 在5/25 CFU/g接种水平下，弯曲菌和大肠杆菌O157检测一致性完美（Kappa=1），沙门氏菌和李斯特菌属（Listeria spp.）出现个别假阳性/阴性，而单核细胞增生李斯特菌表现最不稳定（Kappa=0.5556）。
     

结论与价值： 1. 科学价值
- 首次实现生禽肉中四种病原体的免增菌多重检测，突破传统方法需分步检测的局限。TTD与浓度的量化关系为半定量分析提供新思路。

1. 应用价值
   
   • 检测流程缩短至3小时，适合工业化高通量筛查。Pathotrak系统兼容多种下游检测平台，扩展性强。
     

研究亮点： 1. 技术创新
- 开发Pathotrak NGE系统，整合细菌分离-浓缩-洗脱流程，解决复杂食品基质中低浓度病原体捕获难题。
- 首次将MDS的TTD指标用于食源性病原体浓度估测，建立标准化分析流程（含图像数字化算法PlotDigitizer Pro）。

1. 发现创新
   
   • 揭示不同病原体在相同检测体系中的性能差异，如弯曲菌检测限低至10² CFU/mL，而李斯特菌需优化引物设计。
     

其他价值：该方法可检测非可培养状态（VBNC）病原体，为食品安全风险评估提供新维度。附录中提供的数字化标准曲线（如附录B.1-B.5）为后续研究提供可比数据基准。

（注：专业术语首次出现时保留英文原词，如”环介导等温扩增（LAMP）”、”时间阈值（TTD）”等）