类型a：学术研究报告
1. 研究作者、机构及发表信息
本研究由李志杰（Zhi-Jie Li）、何博（Bo He）、多梅尼奇尼·爱丽丝（Alice Domenichini）等共同第一作者领衔，通讯作者为露丝·甘斯（Ruth Gans）。研究团队来自多个国际知名机构，包括澳大利亚Harry Perkins医学研究所、西澳大利亚大学、德国癌症研究中心（DKFZ）等。该研究于2024年9月17日发表在《Journal of Clinical Investigation》（J Clin Invest）第134卷第18期，标题为《Pericyte phenotypic switching mitigates immune suppression and sensitizes vascularized tumors to immunotherapy》。
2. 学术背景与研究目标
肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）中的血管异常和免疫抑制是癌症治疗的主要障碍。尽管靶向治疗（如MAPK抑制剂）和免疫疗法（如检查点阻断）在部分癌症中取得进展，但耐药性和毒性限制了其长期疗效。周细胞（Pericyte）作为血管外层的支持细胞，其表型可塑性（从合成状态到分化状态）可能影响血管功能与免疫微环境。然而，周细胞如何调控肿瘤免疫应答尚不明确。
本研究旨在揭示周细胞表型转换（通过RGS5-Rho激酶通路）对肿瘤血管正常化、免疫细胞浸润及治疗响应的机制，并提出低剂量靶向治疗联合免疫疗法的转化策略。
3. 研究流程与方法
研究分为以下关键步骤：
（1）体外周细胞表型调控机制验证
- 研究对象：小鼠10T1/2细胞（周细胞模型），通过基因编辑构建RGS5过表达（RGS5myc）和敲低（RGS5shRNA）细胞系。
- 实验方法：
- qPCR与Western blot：验证RGS5表达水平及下游收缩标志物（CNN1、ACTG2）和合成标志物（KLF4、CNX43）的变化。
- 细胞周期分析：流式细胞术检测RGS5对增殖的影响，发现高RGS5表达促进细胞周期进展（G0/G1→S/G2期）。
- 信号通路分析：RGS5通过抑制Rho激酶活性（降低p-MLC）维持合成表型，而敲低RGS5激活Rho/ROCK通路，诱导分化。
（2）体内血管功能与免疫微环境研究
- 动物模型：
- 胰腺神经内分泌肿瘤（RIP1-Tag5）和黑色素瘤（B16-OVA）的RGS5基因敲除（KO）或过表达（HI）小鼠。
- 关键实验：
- 血管灌注与通透性：FITC-lectin灌注实验显示RGS5-KO肿瘤血管灌注增加3倍，通透性降低4倍。
- 免疫细胞分析：流式细胞术证实RGS5-KO肿瘤中M1型巨噬细胞比例升高，CD8+ T细胞浸润增加（OT-I过继转移实验）。
- 缺氧与血管炎症：RGS5-KO肿瘤缺氧减少，ICAM-1表达上调，促进T细胞归巢。
（3）低剂量药物诱导周细胞成熟
- 药物筛选：靶向MEK（曲美替尼）、PI3K/Akt（Bez235）、Notch（DAPT）的低剂量治疗（分别为0.02 mg/kg、10 mg/kg、5 mg/kg）。
- 效果验证：
- 血管正常化：药物组肿瘤灌注改善，胶原沉积减少，周细胞收缩标志物（CNN1）表达上调。
- 免疫协同：低剂量曲美替尼联合OT-I T细胞转移显著延长生存期（p=0.012），而高剂量抑制T细胞功能。
（4）临床前与人类样本验证
- 患者来源异种移植（PDX）模型：低剂量曲美替尼治疗改善血管氧合并增强TILs（肿瘤浸润淋巴细胞）浸润。
- 人类脑膜瘤切片：曲美替尼诱导周细胞CNN1表达，证实跨物种机制保守性。
- 黑色素瘤患者数据：收缩基因特征（CNN1/ACTG2）高表达与生存率正相关（p=0.01）。
4. 主要研究结果
- 机制发现：RGS5通过抑制Rho/ROCK通路维持周细胞合成表态，其下调可激活收缩表型，促进血管稳定。
- 治疗意义：低剂量MEK/PI3K/Notch抑制剂选择性诱导周细胞分化，避免高剂量毒性，且效果持久（8周治疗未出现耐药）。
- 免疫协同：血管正常化通过减少缺氧和增加ICAM-1，增强T细胞浸润，克服免疫检查点阻断耐药。
5. 结论与价值
- 科学价值：首次阐明周细胞表型转换通过RGS5-Rho/ROCK轴调控肿瘤免疫微环境的机制，为“血管-免疫”交互提供新靶点。
- 转化意义：提出“低剂量靶向治疗+免疫疗法”的临床策略，避免传统高剂量疗法的毒性和耐药问题。
6. 研究亮点
- 创新方法：结合基因编辑（RGS5-KO/HI）、低剂量药物筛选和PDX模型，多维度验证周细胞可塑性。
- 跨学科意义：整合血管生物学、免疫学和药理学，为联合疗法设计提供范式。
- 临床启示：收缩基因特征可作为患者分层标志物，指导个性化治疗。
7. 其他价值
研究还发现，抗血管药物（如抗VEGFR2）的长期使用会导致血管退化，而周细胞靶向治疗维持血管稳定性，提示基质靶向需区分“消除”与“成熟”策略。