本研究由J Joseph、A Cardesa和J Carreras共同完成，作者单位分别为西班牙巴塞罗那大学医学院生物化学系（Unit of Biochemistry, Faculty of Medicine, University of Barcelona）和巴塞罗那临床医院病理解剖科（Department of Pathological Anatomy, Clínic Hospital）。论文发表于1997年的《British Journal of Cancer》第76卷第5期，页码600-605。
学术背景
该研究聚焦于肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）及其同工酶在肺癌、结肠癌和肝癌中的活性分布特征。CK是一种广泛存在的酶，催化ATP与肌酸之间的可逆磷酸转移反应，对细胞能量代谢至关重要。哺乳动物组织中存在四种CK亚基：两种胞质型（M-CK和B-CK）和两种线粒体型（UMT-CK和SMT-CK），它们通过组合形成三种二聚体同工酶（MM-CK、MB-CK和BB-CK）。既往研究表明，CK同工酶的分布与肿瘤类型相关，但不同技术（如免疫组化、离子交换色谱）的结果存在矛盾。本研究旨在通过琼脂糖凝胶电泳系统比较正常组织与肿瘤组织中CK活性及同工酶谱的差异，为肿瘤诊断提供潜在标志物。
研究流程与方法
样本收集与处理
- 样本类型：手术切除的肿瘤组织及癌旁正常组织，包括7例肺腺癌、5例肺鳞癌、2例肺类癌、10例结肠腺癌和6例肝细胞癌。
- 样本处理：组织在Tris缓冲液中匀浆，离心后取上清液用于CK活性和同工酶分析。
CK活性测定
- 实验方法：采用国际临床化学联合会（IFCC）推荐的分光光度法，通过NADPH生成速率定量CK活性，单位以μmol/min/g组织或μmol/min/mg蛋白表示。
- 质量控制：排除腺苷酸激酶干扰（通过磷酸肌酸缺失对照实验验证）。
同工酶分析
- 电泳技术：使用琼脂糖凝胶电泳（pH 8.8）分离同工酶，特异性染色后通过密度扫描仪定量条带。
- 抗体抑制实验：用抗M-CK抗体验证MM-CK和MB-CK条带，排除线粒体CK（mt-CK）的干扰。
数据分析
- 统计方法：采用Wilcoxon检验比较肿瘤与正常组织的差异，Kruskal-Wallis检验分析不同组织间CK活性，Mann-Whitney U检验确定组间显著性。
主要结果
CK活性差异
- 肺与结肠肿瘤：肺腺癌、鳞癌及结肠腺癌的CK活性显著低于正常组织（P<0.05），而肺类癌的CK活性高于正常肺组织。
- 肝癌：肝细胞癌与正常肝组织的CK活性无显著差异。
同工酶谱特征
- 正常组织：BB-CK是肺、结肠和肝脏的主要同工酶；正常肺中检测到少量MM-CK，结肠中偶见MB-CK。
- 肿瘤组织：
- 肺类癌：BB-CK占比增加，mt-CK条带消失。
- 结肠腺癌：MB-CK消失，提示M亚基表达下降。
- 肝癌：2例肝细胞癌中BB-CK完全缺失。
血清标志物意义
尽管多数肿瘤的CK活性降低，但患者血清中BB-CK升高可能源于肿瘤细胞坏死导致的酶释放，而非肿瘤本身的高表达。
结论与价值
- 科学意义：揭示了CK同工酶在肿瘤中的特异性分布模式，证实BB-CK可作为肺类癌的潜在标志物，而M亚基表达下降是结肠腺癌的共性特征。
- 应用价值：为血清BB-CK升高的机制提供了新解释（坏死主导），提示其在晚期肿瘤监测中的局限性。
研究亮点
- 方法创新：首次系统比较三种器官肿瘤的CK同工酶电泳图谱，明确抗体抑制实验对mt-CK干扰的排除。
- 发现特殊性：肺类癌的CK活性升高与其他肺癌亚型相反，提示其独特的能量代谢途径。
- 临床启示：强调结合组织特异性同工酶谱与血清标志物动态变化的重要性。
其他价值
研究得到西班牙卫生基金（FIS）和巴塞罗那医院的支持，数据统计由专业团队验证，增强了结果可靠性。文中还讨论了既往文献的矛盾点（如肝组织中MM-CK的误判），为后续研究提供了技术优化方向。