本研究由南充市中心医院肾内科的Wang Zhixin和Liu Shuqin作为共同第一作者，在Xie Xisheng的指导下完成。研究得到了四川省中医药管理局专项研究基金（2024-228）和四川省科技厅专项研究基金（2021YFS025）的资助。该论文发表于《Current Pharmaceutical Biotechnology》期刊，于2025年1月13日被接收，文章DOI号为10.2174/0113892010369197250321083806，属于原创性研究论文。

糖尿病肾病（Diabetic Kidney Disease, DKD）是导致终末期肾病（End-Stage Renal Disease, ESRD）的主要原因之一，患者心血管疾病风险显著升高，死亡率较普通人群高出三倍。尽管新型降糖药物不断出现，DKD的患病率仍在快速上升。在传统中医理论中，DKD被归为“消渴病肾病”范畴，其病机涉及气虚阴亏、热湿瘀血等多个方面。中医药多靶点干预的特点为DKD这一病理机制复杂的疾病提供了新的治疗思路。糖脉康颗粒（Tangmaikang Granules, TMK）是由11味中药组成的复方制剂，包括黄芪、生地黄、黄精、麦冬、牛膝、丹参、赤芍、葛根、桑叶、淫羊藿和黄连，具有益气养阴、活血化瘀、健脾益肾的功效。前期临床研究显示TMK能够降低血糖、血压和血脂，改善胰岛素抵抗，减少尿白蛋白水平，但其确切的活性成分和分子机制尚不清楚。本研究旨在通过整合多种先进技术和方法，系统阐明TMK治疗DKD的活性成分、作用靶点和分子机制。

研究采用了多层次的系统工作流程。第一步通过超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术对TMK颗粒进行化学成分分析。样品经70%甲醇提取后进行色谱分离，采用正负离子模式进行检测，利用MetWare数据库对化合物进行定性鉴定，共鉴定出30种活性化合物，包括8种黄酮类、8种生物碱类、7种酚酸类、4种三萜及其皂苷类、2种木脂素类和1种醌类化合物。随后利用SwissADME平台对这些化合物进行ADME（吸收、分布、代谢、排泄）评估，筛选具有良好药物代谢动力学特性的候选化合物。第二步进行了网络药理学分析。通过SwissTargetPrediction和SuperPred平台预测化合物靶点，获得1410个TMK潜在靶点；从GeneCards、DisGeNET、OMIM和TTD数据库中筛选出3016个DKD相关疾病靶点，两者取交集得到384个共同靶点。构建“化合物-成分-共同靶点”网络并进行拓扑分析，度值排序前10的化合物被确定为核心活性成分。利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（Protein-Protein Interaction, PPI）网络，通过CentiScape 2.2插件的拓扑分析和CytoHubba插件的MCC算法，识别出63个核心靶点和15个关键枢纽靶点，包括TP53、AKT1、BCL2、CASP3、CTNNB1、EGFR、HIF1A、IL1B、IL6、TNF、JUN、MMP9、NFKB1、PTGS2和STAT3。通过Metascape平台进行GO和KEGG通路富集分析，发现TMK主要参与AGE-RAGE信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药、内分泌耐药等194条信号通路，涉及细胞迁移调控、细胞因子信号响应、氧化应激管理等生物学过程。第三步进行分子对接和分子动力学模拟验证。将排名前10的活性化合物与15个关键靶点进行分子对接，所有结合能均低于-5 kcal/mol，显示强结合能力。其中dihydroberberine与MMP9的结合能最低，为-10.2 kcal/mol。选取结合能最低的8对蛋白-配体复合物进行100纳秒的分子动力学模拟，通过RMSD、RMSF、回转半径（Radius of Gyration, Rg）、溶剂可及表面积（Solvent Accessible Surface Area, SASA）、氢键数量和自由能分析等指标评估结合稳定性。除MMP9-dihydroberberine复合物在60纳秒后配体迁移至另一结合位点外，其余7对复合物在整个模拟过程中均保持稳定结合。MM/GBSA算法计算的总结合能均低于-20 kcal/mol，进一步证实了结合的稳定性。

第四步进行了体外实验验证。选用MPC-5小鼠足细胞作为研究对象，分为对照组、高糖组和TMK处理组。首先通过CCK-8实验评估TMK的细胞毒性和有效治疗浓度，结果显示TMK在50-450 µg/ml浓度范围内均无明显细胞毒性，细胞存活率在80%以上。在高糖环境下，100-300 µg/ml的TMK表现出较好的治疗效果，最终确定150 µg/ml为最佳实验浓度。氧化应激检测方面，流式细胞术和DCFH-DA荧光染色结果均显示高糖组足细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）水平显著升高，TMK处理后ROS水平明显降低。同时，TMK处理显著降低了高糖诱导的丙二醛（Malondialdehyde, MDA）水平升高，并恢复了超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）的活性。在炎症和信号通路方面，RT-qPCR和Western blot结果显示高糖刺激激活了p38和NF-κB通路，p38、p-p38、p65和p-p65的蛋白表达均显著增加。TMK处理有效抑制了MAPK/NF-κB通路相关基因和蛋白的表达。ELISA和RT-qPCR检测进一步证实高糖环境下足细胞分泌的IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高，TMK处理显著降低了这些炎症因子的表达。在凋亡方面，流式细胞术检测显示高糖组足细胞凋亡率明显升高，TMK处理后凋亡率显著下降。Western blot分析显示高糖组促凋亡蛋白Bax和Caspase-3水平升高，抗凋亡蛋白Bcl-2水平降低，TMK有效逆转了这些凋亡相关蛋白的变化。

本研究得出的主要结论是：TMK颗粒通过多成分、多靶点的策略发挥对DKD的治疗作用。其核心活性成分包括columbamine、dihydroberberine、jatrorrhizine、p-coumaroyltyramine、n-cis-feruloyltyramine和astragaloside IV等，这些成分通过作用于AKT1、BCL2、CASP3、CTNNB1、EGFR、PTGS2和TNF等关键靶点，调控AGE-RAGE、EGFR、HIF-1和凋亡等多条信号通路。体外实验证实TMK能够显著抑制高糖诱导的足细胞氧化应激、炎症反应和凋亡，其机制与抑制MAPK/NF-κB信号通路密切相关。本研究的科学价值在于首次系统阐明了TMK治疗DKD的活性物质基础和多靶点作用网络，揭示了其抗氧化、抗炎和抗凋亡的协同作用机制。从应用价值来看，该研究为TMK在DKD临床治疗中的应用提供了坚实的理论基础和科学依据，同时也为中药复方治疗复杂疾病的研究提供了方法学范式。研究的突出亮点在于整合了UPLC-MS/MS、网络药理学、分子对接、分子动力学模拟和实验验证等多层次研究手段，形成了从成分鉴定到靶点预测再到功能验证的完整研究链条。特别是分子动力学模拟的应用，不仅验证了分子对接结果的可靠性，还发现了MMP9-dihydroberberine复合物结合位点迁移的特殊现象，为深入理解药物-靶点相互作用的动态行为提供了重要见解。此外，研究选取足细胞作为核心研究对象，紧扣DKD中蛋白尿形成的关键病理环节，使得研究结论具有较强的病理生理学针对性。