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便携式毛细管微等离子体发射光谱仪:金标记与银染信号放大用于癌胚抗原检测

期刊:Analytical ChemistryDOI:10.1021/acs.analchem.4c04082

类型a:这篇文档报告了一项原创研究。

主要作者与机构及发表信息
本研究的主要作者包括Juan He、Miao Hu、Lin Yang等,他们来自西南大学化学与材料科学学院以及四川大学分析测试中心。该研究由Xue Jiang和Juan He共同通讯,发表于《Analytical Chemistry》期刊,出版时间为2024年。

学术背景
这项研究属于生物分析化学领域,专注于开发一种便携式微等离子体光谱仪(portable capillary-microplasma optical emission spectrometer, CLEGD-OES),用于检测癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)。CEA是一种重要的肿瘤标志物,常用于结直肠癌及其他癌症的诊断。传统的免疫分析方法(如横向流动免疫测定、电化学免疫测定和化学发光免疫测定)虽然广泛使用,但在现场即时检测(point-of-care testing, POCT)中存在诸多限制,例如设备笨重、成本高、操作复杂等问题。因此,研究人员设计了一种集成化的3D打印设备,通过结合毛细管液体电极辉光放电(capillary liquid electrode glow discharge, CLEGD)与光学发射光谱仪(optical emission spectrometer, OES),实现了对微量样本中CEA的高灵敏度检测。

研究流程
该研究分为多个步骤,详细描述如下:

  1. 实验准备与试剂
    研究团队制备了多种溶液,包括包被缓冲液、磷酸盐缓冲液(PBS)、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、柠檬酸缓冲液以及银放大溶液。实验对象包括标准CEA溶液和血清样本。所有试剂均为分析纯级,玻璃毛细管内径为75 μm,外径为365 μm。

  2. 免疫分析原理
    采用夹心免疫分析法(sandwich immunoassay),将CEA的一抗固定在96孔板上,随后加入待测样本或标准CEA溶液以及胶体金标记的二抗。通过银沉积放大信号后,利用CLEGD-OES检测银原子发射光谱(Ag atomic emission lines at 328.1 nm)进行定量分析。

  3. 设备设计与优化
    研究团队设计并3D打印了一个体积为3.5 dm³的集成化设备,包含免疫分析平台和检测平台。检测平台包括放电系统、进样系统、微等离子腔室和检测系统。通过优化氩气流速(500 mL/min)、放电电压(11 V)和放电间隙(4.0 mm),确保了设备的稳定性和灵敏度。

  4. 实验参数优化
    对抗体浓度、免疫反应时间、银源选择及银放大时间进行了优化。结果表明,10 μg/mL的一抗、1 μg/mL的抗原、40 μg/mL的胶体金标记二抗以及60分钟的反应时间是最佳条件。银放大时间确定为15分钟,以避免背景信号过高。

  5. 数据分析流程
    样品中的银离子(Ag(I))在微等离子体中被激发并产生发射光谱。通过ICP-OES和CLEGD-OES记录银原子发射信号,并建立校准曲线进行定量分析。

主要结果
1. 银原子发射光谱检测
研究发现,CLEGD-OES能够成功检测到328.1 nm处的银原子发射信号,并且其响应与Ag(I)浓度呈良好的线性关系(R² = 0.990)。这表明设备具有高灵敏度和宽线性范围。

  1. CEA检测性能
    在最优条件下,CLEGD-OES对CEA的检测范围为1-500 ng/mL,检出限(LOD, 3σ)为0.9 ng/mL,与商用ICP-OES相当。此外,在稀释100倍的人血清样本中,CLEGD-OES表现出良好的准确性和重复性。

  2. 银沉积放大效果
    胶体金颗粒(AuNPs)显著加速了银沉积过程,使AuNPs直径显著扩大,从而实现高效信号放大。与未放大信号相比,银信号的灵敏度提高了70倍。

结论与意义
本研究成功开发了一种便携式CLEGD-OES设备,用于现场即时检测CEA。该设备具有高灵敏度、低样品消耗(微升级别)、小体积(3.5 dm³)以及强抗干扰能力等优点。这些特性使其在癌症早期预防和诊断中具有重要应用价值。此外,该研究还展示了微等离子体技术在原子光谱分析领域的巨大潜力。

研究亮点
1. 创新性设备设计
通过3D打印技术实现了设备的高度集成化和小型化,适合POCT应用。

  1. 高效的信号放大策略
    利用胶体金标记和银沉积放大技术,显著提高了检测灵敏度。

  2. 优异的检测性能
    在微量样本中实现了与商用ICP-OES相当的检测性能,同时降低了设备成本和操作复杂性。

其他有价值内容
研究团队还探讨了设备在复杂基质(如人血清)中的适用性,并与其他现场检测技术进行了比较。结果表明,CLEGD-OES在特异性和抗干扰能力方面具有明显优势。此外,该设备的操作简单,适合非专业人员在现场使用。

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