类型a
主要作者与机构及发表信息
这篇研究由Benedetta Apollonio等人完成，主要作者来自伦敦国王学院癌症与制药科学学院（School of Cancer and Pharmaceutical Sciences, Faculty of Life Sciences & Medicine, King’s College London）以及其他多个国际研究机构。该研究于2023年7月3日发表在《临床研究杂志》（*The Journal of Clinical Investigation*），文章编号为JCI166070。
学术背景
本研究属于肿瘤免疫学和肿瘤微环境（Tumor Microenvironment, TME）领域，专注于弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse Large B Cell Lymphoma, DLBCL）中成纤维细胞网状细胞（Fibroblastic Reticular Cells, FRCs）的功能及其对免疫治疗的影响。DLBCL是一种侵袭性B细胞肿瘤，约40%的患者在接受标准R-CHOP（利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、泼尼松和长春新碱）免疫化疗后仍会复发或治疗失败。近年来，随着对肿瘤微环境中基质细胞和免疫细胞景观的研究深入，科学家发现这些细胞在肿瘤免疫逃逸和疾病进展中扮演重要角色。然而，关于FRCs在DLBCL中的具体功能尚不明确。本研究旨在揭示DLBCL如何通过重塑FRC网络影响T细胞功能，并探索靶向FRCs以增强免疫治疗效果的可能性。
详细研究流程
本研究分为以下几个主要步骤：
样本获取与模型构建
研究使用了人类DLBCL患者的淋巴结（Lymph Nodes, LNs）活检样本（n=29）以及小鼠DLBCL模型（iμHA-BCL6小鼠）。此外，还收集了非恶性反应性淋巴结（Reactive Lymph Nodes, RLNs）作为对照（n=5）。
成像与表型分析
使用高维成像质谱流式技术（Imaging Mass Cytometry, IMC）和共聚焦显微镜对FRC网络进行表征。研究团队开发了一种基于骨架分析（Skeleton Analysis）的方法，用于量化FRC分支点数量和长度。此外，通过IMC分析检测了FAP（Fibroblast-Activated Protein）等标记物的表达水平。
体外培养与功能实验
构建了2D和3D共培养系统，包括原代FRCs与DLBCL细胞系或原代DLBCL B细胞的直接接触共培养。实验评估了DLBCL暴露对FRC形态、收缩能力、迁移支持能力以及免疫调节功能的影响。
转录组分析
对DLBCL-FRCs进行了批量RNA测序（Bulk RNA-Seq）和单细胞RNA测序（scRNA-Seq）。通过基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis, GSEA）和差异表达基因（Differentially Expressed Genes, DEGs）分析，揭示了DLBCL诱导的FRC转录组重编程特征。
功能验证实验
包括T细胞迁移实验、细胞毒性实验以及免疫检查点抑制剂（如PD-L1/PD-L2阻断抗体）对T细胞功能的恢复实验。此外，利用患者来源的淋巴结切片建立器官型培养系统（Organotypic Cultures），评估了FAP靶向免疫刺激药物与Glofitamab联合治疗的效果。
主要结果
1. DLBCL诱导FRC网络重塑
IMC和共聚焦显微镜分析显示，DLBCL患者的LN中存在显著扩张且异常重塑的FRC网络，其特征是分支点减少、分支长度增加，以及FAP表达升高。这些变化类似于急性免疫反应状态下的FRC激活，但持续时间更长。
DLBCL-FRCs的功能改变
功能实验表明，DLBCL暴露导致FRCs失去收缩能力并表现出拉伸形态。DLBCL-FRCs在体外显著抑制了CD8+ T细胞的迁移能力和细胞毒性功能，这种抑制作用依赖于抗原特异性机制。此外，DLBCL-FRCs上调了PD-L1和PD-L2的表达，进一步抑制了T细胞功能。
转录组重编程揭示免疫调节机制
转录组分析显示，DLBCL-FRCs中涉及炎症信号、趋化因子表达、抗原呈递和细胞外基质重塑的关键通路被显著激活。例如，CXCL9和CXCL10的表达增加，而稳态趋化因子CCL21和CCL19的表达下降。这些变化可能导致T细胞迁移受阻。
靶向FRCs增强免疫治疗效果
在器官型培养系统中，FAP靶向免疫刺激药物（如FAP-IL2v和FAP-4-1BBL）与Glofitamab联合使用显著增强了抗DLBCL T细胞的杀伤功能。此外，阻断PD-L1/PD-L2也能够部分恢复T细胞活性，表明FRCs的抑制作用可以通过靶向治疗逆转。
结论与意义
本研究表明，DLBCL通过重塑FRC网络形成了一种慢性激活的CAF样状态，这种状态不仅支持肿瘤生态位，还促进了免疫抑制性微环境的形成。研究揭示了FRCs在DLBCL中的双重角色：一方面支持正常免疫反应，另一方面通过表达抑制性配体（如PD-L1/PD-L2）抑制T细胞功能。这一发现为理解DLBCL的免疫逃逸机制提供了新视角，并提出了靶向FRCs以优化免疫治疗的新策略。
研究亮点
1. 首次系统描述了DLBCL中FRC网络的异常重塑及其功能改变。
2. 揭示了FRCs在DLBCL中通过上调PD-L1/PD-L2抑制T细胞功能的机制。
3. 提出了靶向FAP+ FRCs以增强免疫治疗效果的新方法，并在患者来源的器官型培养系统中验证了其可行性。
4. 利用先进的IMC和scRNA-Seq技术，全面解析了DLBCL-FRCs的转录组特征及其对免疫微环境的影响。
其他有价值内容
本研究还探讨了FRCs与其他免疫细胞（如巨噬细胞）的潜在相互作用，为进一步研究FRCs在肿瘤微环境中的多样性功能奠定了基础。此外，研究团队提出了一种新的假设，即DLBCL可能通过劫持B细胞衍生信号维持慢性炎症状态下的FRC激活，这为未来探索肿瘤-基质细胞双向对话提供了方向。