本文档属于类型a，即报告了一项原创性研究的学术论文。以下是针对该研究的详细学术报告：
作者及机构
本研究由Domenico Lo Tartaro（第一作者）、Beatrice Aramini和Valentina Masciale等来自意大利莫德纳和雷焦艾米利亚大学（University of Modena and Reggio Emilia）、G.B. Morgagni-L. Pierantoni医院等机构的研究团队合作完成，通讯作者为Sara De Biasi和Andrea Cossarizza。论文发表于期刊*Molecular Cancer*，发表日期为2025年，论文标题为《Metabolically activated and highly polyfunctional intratumoral VISTA+ regulatory B cells are associated with tumor recurrence in early-stage NSCLC》。
学术背景
非小细胞肺癌（NSCLC）是全球第二大常见癌症，手术切除是早期和局部晚期NSCLC的标准治疗方式，但术后30%-55%的患者会出现复发。肿瘤微环境（TME）中的免疫细胞，特别是B细胞和T细胞的相互作用，对肿瘤进展和免疫治疗响应具有重要影响。近年来，B细胞被发现是调控肿瘤免疫的关键角色，尤其是具有免疫抑制功能的调节性B细胞（Bregs）。然而，Bregs在NSCLC中的表型特征、代谢状态及其与T细胞的相互作用机制仍不清楚。此外，抑制性免疫检查点分子VISTA（V-domain Ig suppressor of T-cell activation）及其配体PSGL-1（P-selectin glycoprotein ligand-1）在肿瘤免疫中的作用尚未充分阐明。本研究旨在揭示NSCLC肿瘤微环境中VISTA+ Bregs的代谢和功能特征，探索这些细胞与PSGL-1+ T细胞的相互作用及其对肿瘤复发的潜在影响。
研究流程与方法
1. 样本收集与处理
研究纳入了48例早期NSCLC患者（IA-IIIA期）的肿瘤组织和外周血样本。所有患者均未接受过化疗或放疗。肿瘤组织通过手术切除后，使用机械法和酶解法分离肿瘤浸润淋巴细胞（TILs），外周血单核细胞（PBMCs）通过Ficoll密度梯度离心法分离。
多色流式细胞术与质谱流式细胞术
研究团队采用了19参数的多色流式细胞术（polychromatic flow cytometry）和质谱流式细胞术（CyTOF）分析B细胞和T细胞的表型及代谢特征。对472,627个肿瘤浸润B细胞和538,862个外周血B细胞进行了聚类分析（FlowSOM算法），发现20个B细胞亚群，其中两个亚群（C18和C20）被鉴定为VISTA+ Bregs。
空间转录组学分析
利用公开的空间转录组数据，研究了B细胞与T细胞在三级淋巴结构（TLS）中的空间分布及相互作用。通过NicheNet算法预测了B细胞与T细胞之间的配体-受体对，发现VISTA-PSGL-1轴可能是潜在的调控通路。
代谢分析
采用单细胞代谢调控组分析（scMEP），通过检测19种代谢蛋白（如GLUT1、LDHA、CPT1A等）的表达水平，评估B细胞和T细胞的代谢状态。结果显示，VISTA+ Bregs表现出高代谢活性和多功能性，能够同时分泌IL-10、TGF-β、GM-CSF等细胞因子。
功能实验
通过体外刺激实验（PMA/离子霉素），分析了VISTA+ Bregs和PSGL-1+ T细胞的细胞因子分泌能力。VISTA+ Bregs表现出高水平的IL-10和TGF-β分泌，而PSGL-1+ T细胞则显示出更强的细胞毒性（如颗粒酶B和穿孔素表达）。
计算模型与预后分析
通过Pencil算法和Cox比例风险模型，预测了特定免疫细胞亚群与肿瘤复发的关联。结果显示，肿瘤中VISTA+ Bregs和PSGL-1+ T细胞的高比例与术后12个月内的高复发风险显著相关。
主要研究结果
1. VISTA+ Bregs的发现
通过流式细胞术和质谱分析，首次在NSCLC肿瘤微环境中鉴定出VISTA+ Bregs。这些细胞高表达IL-10和VISTA，并在肿瘤组织中富集（占比高于外周血）。伪时间分析（pseudotime analysis）表明，VISTA+ Bregs的分化轨迹与浆细胞不同，提示其可能来源于独特的调控途径。
代谢特征
scMEP分析显示，VISTA+ Bregs具有高代谢需求，激活了糖酵解、三羧酸循环（TCA）、脂肪酸氧化（FAO）和氨基酸代谢通路。这些代谢特征与免疫抑制功能相关，例如IL-10的分泌依赖于线粒体活性。
空间定位与相互作用
空间转录组和多重免疫荧光显示，VISTA+ Bregs与PSGL-1+ T细胞在TLS边缘共定位，支持VISTA-PSGL-1轴作为潜在的免疫抑制机制。NicheNet分析预测，这种相互作用可能通过上调CTLA-4和FASLG等基因抑制T细胞功能。
PSGL-1+ T细胞的特性
PSGL-1+ CD4+和CD8+ T细胞表现出高细胞毒性（颗粒酶B+）及代谢激活状态，但同时高表达PD-1和CTLA-4，提示其功能可能受抑制性微环境调控。
预后意义
计算模型发现，VISTA+ Bregs和PSGL-1+ T细胞的高比例是术后复发的独立预测因素（HR=1.41，95% CI=0.98-2.03），而缺乏PSGL-1- TRM细胞的患者复发风险更低（HR=0.64）。
研究结论与意义
本研究首次揭示了NSCLC肿瘤微环境中VISTA+ Bregs的代谢活性和功能特性，并提出了VISTA-PSGL-1轴作为新的免疫抑制机制。这些发现为理解肿瘤复发提供了新的视角：
- 科学价值：阐明Bregs通过代谢重编程和细胞间接触抑制抗肿瘤免疫的机制。
- 临床价值：VISTA和PSGL-1可作为预测复发或免疫治疗耐药性的生物标志物，并为靶向干预提供新策略（如联合阻断VISTA和PD-1）。
研究亮点
1. 创新性发现：首次报道VISTA在Bregs上的表达及其与PSGL-1+ T细胞的相互作用。
2. 多组学方法：结合流式细胞术、空间转录组和代谢组学，全面解析免疫细胞功能。
3. 临床转化潜力：提出的预测模型可指导术后辅助治疗的选择。
其他有价值的内容
研究还发现VISTA+ Bregs在反应性淋巴结和肝癌组织中存在，提示其在多种肿瘤微环境中的潜在普适性作用。此外，代谢干预（如靶向CD36或CPT1A）可能成为未来联合治疗的方向。